拟南芥糖基转移酶基因UGT91C1抗除草剂磺草酮的作用分析
发布时间：2021-09-12 15:52
随着现代农业水平不断提高,除草剂的使用日益广泛。植物由于自身代谢的特异性能够减弱或消除除草剂带来的伤害,获得除草剂抗性,是现阶段抗除草剂植物研究的重要理论依据。植物体如何广泛地应对除草剂的选择毒性,以此取得除草效益最大化成为人们最关注的问题。植物体内普遍存在的糖基转移酶能够对受体分子进行糖基化修饰,改变受体的物理特性及生物活性,因而在解除除草剂的毒性方面具有重要应用潜力。糖基转移酶家族成员数量众多,功能多种多样,大多数糖基转移酶成员的催化底物并不明确,功能并不清楚,值得深入研究。我们根据公开的芯片数据得知,拟南芥糖基转移酶基因UGT91C1受到人工合成的除草剂诱导后表达上调,因此推测该基因可能参与植物对除草剂的响应过程。本文对拟南芥糖基转移酶基因UGT91C1进行了相关研究,试图明确其对除草剂的生化活性以及抗除草剂的功能作用,进而探索植物糖基转移酶在培育抗除草剂作物上的应用潜力。主要研究内容与结果如下:首先应用qRT-PCR分析证明了糖基转移酶基因UGT91C1能够受多种除草剂的诱导表达上调。接着通过糖基转移酶蛋白的原核表达、纯化与体外生化酶活鉴定,发现糖基转移酶UGT91C1可以糖基...
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－２－３?ｔ／Ｇｒ９／Ｃ／的原核表达载体的构建与酶切结果??Ａ：表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－３质粒图谱??Ｂ：?ｐＧＥＸ－４Ｔ－３－＾／Ｇ：Ｔ９／Ｃ７?载体?Ｂａｍ?Ｈ?Ｉ＋Ａ７ｉ〇?１?双酶切验证（１３８３?ｂｐ）??
?山东大学硕士学位论文???蛋白纯化，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ进行目的蛋白检测结果如图３－２－４所示。Ｂ泳道为纯??化后的ＧＳＴ－ＵＧＴ９１Ｃ１融合蛋白，条带所处的位置位于７０ｋＤａ－１００ｋＤａ之间，与??预期中ＵＧＴ９１Ｃ１融合蛋白大小相一致，而在２５?ｋＤａ－３０?ｋＤａ大小之间也出现一??条微弱条带，应为融合蛋白中ＧＳＴ标签（？２６?ｋＤａ）的脱离，这一现象在ｐＧＥＸ蛋??白纯化系统中较为常见。??Ａ?Ｂ??ｌＯＯｋＤａ???裏—??５０ｋＤａ??＾｜｜｜｜畴??４５ｋＤａ???３０ｋＤａ??：ｒ??：５ｋＤａ???１４ｋＤａ???图３－２－４纯化后ＵＧＴ９１Ｃ１融合蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测??Ａ?：?Ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｍａｒｋｅｒ??８：０８丁－１；０丁９１（：１融合蛋白（？７７．８让〇３）??２．２．２?ＵＧＴ９１Ｃ１融合蛋白活性鉴定??为鉴定糖基转移酶ＵＧＴ９１Ｃ１的糖基化底物，进一步明确ｔ／Ｇ７Ｐ／Ｃ７在植物??体中发挥的功能，根据上文中基因受除草剂诱导表达情况，选取多种??除草剂作为底物进行体外酶促实验试图确定其作用底物，其中包括磺草酮、硝磺??草酮、２，４－Ｄ、溴苯腈、麦草畏，草胺膦、草甘膦、灭草烟等几种常用的除草剂，??对酶促反应体系进行ＨＰＬＣ检测，结果发现与不含有ＧＳＴ－ＵＧＴ９１Ｃ１的酶促反应??体系相比，ＧＳＴ－ＵＧＴ９１Ｃ１融合蛋白只对磺草酮具有糖基化活性，出现了新的产??物峰，而该融合蛋白对其他几种除草剂没有新的产物峰出现，即表明对磺草酮以??外的几种除草剂没有酶促活性。检测结果如图３－２－５和表３－１：??４０??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]3-苯甲酰基-4-羟基香豆素衍生物的合成、晶体结构及其除草活性研究[J]. 刘斌,谢龙观,徐效华,李永红. 有机化学. 2011(12)
本文编号：3394510
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－２－３?ｔ／Ｇｒ９／Ｃ／的原核表达载体的构建与酶切结果??Ａ：表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－３质粒图谱??Ｂ：?ｐＧＥＸ－４Ｔ－３－＾／Ｇ：Ｔ９／Ｃ７?载体?Ｂａｍ?Ｈ?Ｉ＋Ａ７ｉ〇?１?双酶切验证（１３８３?ｂｐ）??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]3-苯甲酰基-4-羟基香豆素衍生物的合成、晶体结构及其除草活性研究[J]. 刘斌,谢龙观,徐效华,李永红. 有机化学. 2011(12)
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