皱纹盘鲍脯氨酸内肽酶性质及晶体结构的研究
发布时间：2021-11-02 19:28
脯氨酸内肽酶（Prolyl endopeptidase,PEP,[EC 3.4.21.26]）,也称脯氨酰寡肽酶（Prolyl oligopeptidase,POP）,是丝氨酸蛋白酶家族中的一类水解酶。该酶在脯氨酸残基羧基端水解小肽（<33个氨基酸）。本研究以来源于皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）肌肉的重组PEP（Hdh-PEP）为研究对象,对Hdh-PEP的酶学性质、结构特征以及功能进行了相关研究。荧光定量PCR分析表明Hdh-PEP在鲍鱼各组织中均有分布,且在性腺、肌肉及血液中表达量较高。以Suc-Gly-Pro-MCA为底物,检测鲍鱼不同组织中Hdh-PEP的酶活,发现在性腺中酶活力最高。通过培养表达菌株获取较高浓度的重组Hdh-PEP,并检测其比活力为6.52 U/mg。圆二色光谱分析显示,Hdh-PEP二级结构无规卷曲（47.3%）占比最多,β-折叠和α-螺旋分别占比31.6%和21.1%。蛋白晶体结构显示,Hdh-PEP由催化结构域和β-螺旋桨结构域两部分组成,两个区域一侧通过铰链连接,二者因氢键、盐桥以及疏水作用力而靠近,呈闭合式构象。Hdh...
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略表
第1章 引言
1.1 鲍鱼
1.2 脯氨酸内肽酶(PEP)的研究现状
1.2.1 PEP的分布情况
1.2.2 PEP的基本性质
1.2.3 PEP在医学领域中的研究
1.2.4 PEP在食品领域中的研究
1.3 研究意义及研究内容
1.3.1 研究意义
1.3.2 研究内容
第2章 材料与方法
2.1 实验材料与试剂
2.1.1 实验原料
2.1.2 实验试剂
2.2 实验所用溶液及其配制方法
2.2.1 Hdh-PEP原核表达所用溶液
2.2.2 Hdh-PEP纯化所用缓冲液
2.2.3 SDS-PAGE所用溶液
2.2.4 Western blotting所用溶液
2.2.5 Hdh-PEP晶体培养所用溶液
2.2.6 不同pH值缓冲液
2.3 实验仪器与设备
2.4 实验方法
2.4.1 Hdh-PEP的表达及纯化
2.4.2 Hdh-PEP的酶活力测定
2.4.3 兔抗Hdh-PEP多克隆抗体的制备
2.4.4 Hdh-PEP在鲍鱼各组织中基因水平的表达差异
2.4.5 Hdh-PEP在鲍鱼各组织中的酶活性差异
2.4.6 圆二色光谱分析
2.4.7 荧光光谱法分析
2.4.8 Hdh-PEP晶体培养及结构解析
2.4.9 不同物种PEP的结构差异分析
2.4.10 Hdh-PEP底物通道分析
2.4.11 分子动力学模拟
2.4.12 胰蛋白酶对Hdh-PEP-抑制剂复合物的水解作用
2.4.13 Hdh-PEP对胶原小肽的降解
2.4.14 数据分析
第3章 结果与分析
3.1 Hdh-PEP的重组表达及纯化
3.2 Hdh-PEP多克隆抗体的制备
3.3 Hdh-PEP在鲍鱼各组织中基因水平的表达差异
3.4 Hdh-PEP在鲍鱼各组织中的酶活性差异
3.5 Hdh-PEP的二级结构分析
3.6 pH对 Hdh-PEP表面疏水性的影响
3.7 温度对Hdh-PEP表面疏水性的影响
3.8 Hdh-PEP晶体培养及结构解析
3.9 不同物种PEP的结构差异分析
3.10 Hdh-PEP的底物通道分析
3.11 分子动力学模拟
3.12 胰蛋白酶对Hdh-PEP-抑制剂复合物的水解作用
3.13 Hdh-PEP对胶原小肽的降解
第4章 讨论
4.1 Hdh-PEP的晶体结构分析
4.2 Hdh-PEP对胶原蛋白的降解作用
4.3 Hdh-PEP的分子动态学模拟分析
4.4 Hdh-PEP与抑制剂相互作用机理
第5章 主要结论与展望
5.1 主要结论
5.2 创新点
5.3 展望
致谢
参考文献
在学期间科研成果情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]优化Ⅰ型胶原蛋白的纯化工艺[J]. 刘雯恩,周艳芳,范志强,李玉玲,甘兵,彭新生. 精细化工. 2019(05)
[2]脯氨酸内肽酶研究进展[J]. 饶承冬,叶浪,李美良,李树红. 基因组学与应用生物学. 2019(03)
[3]蓝圆鲹骨骼肌脯氨酸内肽酶的分离纯化及其对胶原肽的作用[J]. 唐俊,颜龙杰,翁凌,孙乐常,刘光明,曹敏杰. 现代食品科技. 2016(06)
[4]草鱼肌肉脯氨酸内肽酶的研究[J]. 翁凌,林韵,张玲,张凌晶,颜龙杰,刘光明,曹敏杰. 中国食品学报. 2015(09)
[5]Diagnosis of gluten related disorders: Celiac disease, wheat allergy and non-celiac gluten sensitivity[J]. Luca Elli,Federica Branchi,Carolina Tomba,Danilo Villalta,Lorenzo Norsa,Francesca Ferretti,Leda Roncoroni,Maria Teresa Bardella. World Journal of Gastroenterology. 2015(23)
[6]环糊精水解酶底物运输通道的动态结构分析[J]. 闭海,莫莉,郭媛,林丽华,黄日波,庞浩. 广西科学. 2014(01)
[7]高性能大规模分子动力学的前沿进展——近35年生物体系的分子动力学模拟研究回顾[J]. 蔡文生,Christophe Chipot. 化学学报. 2013(02)
[8]脯氨酰内肽酶水解啤酒蛋白的研究[J]. 周丽娜,张鹭,路福平,杨迪,向先长. 食品与发酵工业. 2008(02)
[9]脯氨酰内肽酶研究进展[J]. 李民,陈常庆. 生物化学与生物物理进展. 2000(02)
博士论文
[1]拟穴青蟹（Scylla paramamosain）肌浆蛋白过敏原的致敏性研究[D]. 杨阳.集美大学 2018
[2]蛋白质与配体相互作用机理的分子模拟研究[D]. 刘明.北京工业大学 2010
硕士论文
[1]鲢鱼肌肉脯氨酰内肽酶及抑制肽的研究[D]. 谢雪琼.集美大学 2019
[2]皱纹盘鲍脯氨酰内肽酶的分子克隆、体外表达及相关性质分析[D]. 李越.集美大学 2018
[3]罗非鱼和鲈鱼骨骼肌脯氨酸内肽酶的研究[D]. 肖琳琳.集美大学 2017
[4]蚕蛹蛋白源ACE抑制多肽的结构鉴定及抑制机理研究[D]. 王朝阳.广西大学 2016
[5]皱纹盘鲍肌肉质构相关蛋白酶的研究[D]. 游银川.集美大学 2016
[6]烟曲霉脯氨酰内肽酶的基因克隆、表达及其性质[D]. 李宁环.江南大学 2013
本文编号：3472262
【文章来源】：集美大学福建省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略表
第1章 引言
1.1 鲍鱼
1.2 脯氨酸内肽酶(PEP)的研究现状
1.2.1 PEP的分布情况
1.2.2 PEP的基本性质
1.2.3 PEP在医学领域中的研究
1.2.4 PEP在食品领域中的研究
1.3 研究意义及研究内容
1.3.1 研究意义
1.3.2 研究内容
第2章 材料与方法
2.1 实验材料与试剂
2.1.1 实验原料
2.1.2 实验试剂
2.2 实验所用溶液及其配制方法
2.2.1 Hdh-PEP原核表达所用溶液
2.2.2 Hdh-PEP纯化所用缓冲液
2.2.3 SDS-PAGE所用溶液
2.2.4 Western blotting所用溶液
2.2.5 Hdh-PEP晶体培养所用溶液
2.2.6 不同pH值缓冲液
2.3 实验仪器与设备
2.4 实验方法
2.4.1 Hdh-PEP的表达及纯化
2.4.2 Hdh-PEP的酶活力测定
2.4.3 兔抗Hdh-PEP多克隆抗体的制备
2.4.4 Hdh-PEP在鲍鱼各组织中基因水平的表达差异
2.4.5 Hdh-PEP在鲍鱼各组织中的酶活性差异
2.4.6 圆二色光谱分析
2.4.7 荧光光谱法分析
2.4.8 Hdh-PEP晶体培养及结构解析
2.4.9 不同物种PEP的结构差异分析
2.4.10 Hdh-PEP底物通道分析
2.4.11 分子动力学模拟
2.4.12 胰蛋白酶对Hdh-PEP-抑制剂复合物的水解作用
2.4.13 Hdh-PEP对胶原小肽的降解
2.4.14 数据分析
第3章 结果与分析
3.1 Hdh-PEP的重组表达及纯化
3.2 Hdh-PEP多克隆抗体的制备
3.3 Hdh-PEP在鲍鱼各组织中基因水平的表达差异
3.4 Hdh-PEP在鲍鱼各组织中的酶活性差异
3.5 Hdh-PEP的二级结构分析
3.6 pH对 Hdh-PEP表面疏水性的影响
3.7 温度对Hdh-PEP表面疏水性的影响
3.8 Hdh-PEP晶体培养及结构解析
3.9 不同物种PEP的结构差异分析
3.10 Hdh-PEP的底物通道分析
3.11 分子动力学模拟
3.12 胰蛋白酶对Hdh-PEP-抑制剂复合物的水解作用
3.13 Hdh-PEP对胶原小肽的降解
第4章 讨论
4.1 Hdh-PEP的晶体结构分析
4.2 Hdh-PEP对胶原蛋白的降解作用
4.3 Hdh-PEP的分子动态学模拟分析
4.4 Hdh-PEP与抑制剂相互作用机理
第5章 主要结论与展望
5.1 主要结论
5.2 创新点
5.3 展望
致谢
参考文献
在学期间科研成果情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]优化Ⅰ型胶原蛋白的纯化工艺[J]. 刘雯恩,周艳芳,范志强,李玉玲,甘兵,彭新生. 精细化工. 2019(05)
[2]脯氨酸内肽酶研究进展[J]. 饶承冬,叶浪,李美良,李树红. 基因组学与应用生物学. 2019(03)
[3]蓝圆鲹骨骼肌脯氨酸内肽酶的分离纯化及其对胶原肽的作用[J]. 唐俊,颜龙杰,翁凌,孙乐常,刘光明,曹敏杰. 现代食品科技. 2016(06)
[4]草鱼肌肉脯氨酸内肽酶的研究[J]. 翁凌,林韵,张玲,张凌晶,颜龙杰,刘光明,曹敏杰. 中国食品学报. 2015(09)
[5]Diagnosis of gluten related disorders: Celiac disease, wheat allergy and non-celiac gluten sensitivity[J]. Luca Elli,Federica Branchi,Carolina Tomba,Danilo Villalta,Lorenzo Norsa,Francesca Ferretti,Leda Roncoroni,Maria Teresa Bardella. World Journal of Gastroenterology. 2015(23)
[6]环糊精水解酶底物运输通道的动态结构分析[J]. 闭海,莫莉,郭媛,林丽华,黄日波,庞浩. 广西科学. 2014(01)
[7]高性能大规模分子动力学的前沿进展——近35年生物体系的分子动力学模拟研究回顾[J]. 蔡文生,Christophe Chipot. 化学学报. 2013(02)
[8]脯氨酰内肽酶水解啤酒蛋白的研究[J]. 周丽娜,张鹭,路福平,杨迪,向先长. 食品与发酵工业. 2008(02)
[9]脯氨酰内肽酶研究进展[J]. 李民,陈常庆. 生物化学与生物物理进展. 2000(02)
博士论文
[1]拟穴青蟹（Scylla paramamosain）肌浆蛋白过敏原的致敏性研究[D]. 杨阳.集美大学 2018
[2]蛋白质与配体相互作用机理的分子模拟研究[D]. 刘明.北京工业大学 2010
硕士论文
[1]鲢鱼肌肉脯氨酰内肽酶及抑制肽的研究[D]. 谢雪琼.集美大学 2019
[2]皱纹盘鲍脯氨酰内肽酶的分子克隆、体外表达及相关性质分析[D]. 李越.集美大学 2018
[3]罗非鱼和鲈鱼骨骼肌脯氨酸内肽酶的研究[D]. 肖琳琳.集美大学 2017
[4]蚕蛹蛋白源ACE抑制多肽的结构鉴定及抑制机理研究[D]. 王朝阳.广西大学 2016
[5]皱纹盘鲍肌肉质构相关蛋白酶的研究[D]. 游银川.集美大学 2016
[6]烟曲霉脯氨酰内肽酶的基因克隆、表达及其性质[D]. 李宁环.江南大学 2013
本文编号：3472262
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/benkebiyelunwen/3472262.html
