AnDHN提高拟南芥非生物胁迫抗性分析
发布时间：2021-11-07 00:40
脱水素（Dehydrin,DHN）属于胚胎发育晚期丰富蛋白第二家族（LEA-II）,是脱水胁迫响应基因的主要一类。干旱,高盐和低温等非生物胁迫会导致植物体内出现脱水胁迫,诱导脱水素大量表达,从而保护蛋白质、核酸和细胞膜等。然而,植物体内不同类型的DHN蛋白在植物生长发育及抵抗非生物胁迫过程中发挥的功能存在较大差异。新疆沙冬青（Ammopiptanthus nanus）,作为一种强抗逆沙漠植被,探究其抗逆分子机理将有助于我们改良农作物抗逆性,从而为提高作物产量与质量服务。在本课题组前期研究中,我们克隆获得了一个新疆沙冬青脱水素（AnDHN）基因。为了明确AnDHN基因在新疆沙冬青抵抗非生物胁迫中的功能,我们构建了AnDHN超表达载体,并将其转入拟南芥中;以AnDHN转基因拟南芥T3代纯合体为试验材料,进行多种非生物胁迫抗性分析,观察转基因拟南芥抗逆性,从而探究AnDHN基因在非生物胁迫中的功能。主要结果如下:1.本试验采用in-fusion连接方法构建了pCAMBIA1302-AnDHN-GFP重组质粒,并利用瞬时表达的方法,将含有重组质粒载体的农杆菌注入烟草叶片中;同时,以PAD62M...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒的菌液PCR鉴定注:M:DL2000;1-3:重组质粒
沈阳农业大学硕士学位论文19图2-1重组质粒的菌液PCR鉴定注:M:DL2000;1-3:重组质粒Fig.2-1BacterialPCRIdentificationofRecombinantPlasmidM:DL2000marker;Lane1-3:Recombinantplasmid图2-2重组质粒的测序结果Fig.2-2Theresultofrecombinantplasmidsequencing2.3.2重组质粒转化农杆菌PCR检测将pCAMBIA1302-AnDHN-GFP重组质粒转入GV3101农杆菌感受态中，使用重组质粒的特异性引物进行扩增，进行菌液PCR检测，结果显示电泳条带大小符合目的片
第二章新疆沙冬青AnDHN基因的亚细胞定位20段（图2-7），证明pCAMBIA1302-AnDHN-GFP表达载体已经成功转入GV3101农杆菌感受态中，可以用于下一步烟草注射试验。图2-3重组质粒转化农杆菌PCR检测注:M:DL2000；1-3:重组质粒Fig.2-3RecombinantplasmidtransformationofAgrobacteriumPCRdetectionM:DL2000marker;Lane1-3:Recombinantplasmid2.3.3AnDHN的亚细胞定位预测为了明确AnDHN蛋白在植物细胞中的功能和分布，本试验使用SignalP4.1对AnDHN蛋白进行信号肽预测，利用targetP对AnDHN蛋白的亚细胞分布进行预测。结果表明：AnDHN蛋白并无明显的信号肽，这暗示其不属于分泌蛋白，不能够进行独立跨膜运输；同时，targetP预测结果表明AnDHN蛋白可能分布于除了叶绿体，线粒体及高尔基体的其它亚细胞位置（图2-8）图2-4AnDHN亚细胞定位预测Fig.2-4PredictionofsubcellularlocalizationofAnDHN2.3.4AnDHN蛋白为膜蛋白通过绿色荧光蛋白和marker对AnDHN的亚细胞定位进行研究，首先选择构建好的表达载体pCAMBIA1302-AnDHN-GFP和PAD62细胞膜的位置标记marker，等比例混合后，注射烟草烟进行瞬时表达，使用共聚焦显微镜观察AnDHN蛋白的亚细胞定位情
【参考文献】：
期刊论文
[1]干旱胁迫及复水对大豆抗坏血酸-谷胱甘肽循环的影响[J]. 董守坤,马玉玲,李爽,董娜,刘丽君. 东北农业大学学报. 2018(01)
[2]新疆沙冬青引种栽培技术及园林应用初探[J]. 周禧琳,袁林. 塔里木大学学报. 2016(04)
[3]高粱ATP合成酶E亚基基因（SbATPase-E）的克隆及其抗逆功能研究[J]. 张静,张登峰,孙永华,李永祥,石云素,宋燕春,杜金友,王天宇,黎裕. 植物遗传资源学报. 2016(05)
[4]植物非生物胁迫的研究进展[J]. 于新海,李濛,周红昕. 农业与技术. 2016(09)
[5]濒危植物新疆沙冬青遗传多样性的RAPD分析[J]. 赵鹏,雍晓鹏,胡国臣,吕婷,焦培培. 干旱区资源与环境. 2016(03)
[6]转基因小麦中bar基因检测方法研究[J]. 李太强,高亚男,高居荣,王洪刚,李兴锋. 麦类作物学报. 2015(09)
[7]新疆沙冬青植物群落特征研究[J]. 麦尔哈巴·阿布拉,刘博,李征珍,杨琼,石莎,冯金朝. 中央民族大学学报(自然科学版). 2015(03)
[8]枇杷7个脱水素基因表达差异分析[J]. 徐红霞,李晓颖,陈俊伟,冯健君,徐昌杰. 园艺学报. 2014(08)
[9]珍稀濒危植物新疆沙冬青胚根愈伤组织诱导及植株再生[J]. 焦培培,王彦芹,祁正伟,张莉,康少峰,严建龙,李彬. 北方园艺. 2012(20)
[10]沙冬青属植物在亚洲中部荒漠区的潜在地理分布及驱动因子分析[J]. 马松梅,张明理,陈曦. 中国沙漠. 2012(05)
硕士论文
[1]小麦脱水素WDHN1基因的克隆及其功能分析[D]. 刘浩.西北农林科技大学 2016
[2]茶树脱水素基因结构与表达差异分析[D]. 陈静.安徽农业大学 2014
本文编号：3480828
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒的菌液PCR鉴定注:M:DL2000;1-3:重组质粒
沈阳农业大学硕士学位论文19图2-1重组质粒的菌液PCR鉴定注:M:DL2000;1-3:重组质粒Fig.2-1BacterialPCRIdentificationofRecombinantPlasmidM:DL2000marker;Lane1-3:Recombinantplasmid图2-2重组质粒的测序结果Fig.2-2Theresultofrecombinantplasmidsequencing2.3.2重组质粒转化农杆菌PCR检测将pCAMBIA1302-AnDHN-GFP重组质粒转入GV3101农杆菌感受态中，使用重组质粒的特异性引物进行扩增，进行菌液PCR检测，结果显示电泳条带大小符合目的片
第二章新疆沙冬青AnDHN基因的亚细胞定位20段（图2-7），证明pCAMBIA1302-AnDHN-GFP表达载体已经成功转入GV3101农杆菌感受态中，可以用于下一步烟草注射试验。图2-3重组质粒转化农杆菌PCR检测注:M:DL2000；1-3:重组质粒Fig.2-3RecombinantplasmidtransformationofAgrobacteriumPCRdetectionM:DL2000marker;Lane1-3:Recombinantplasmid2.3.3AnDHN的亚细胞定位预测为了明确AnDHN蛋白在植物细胞中的功能和分布，本试验使用SignalP4.1对AnDHN蛋白进行信号肽预测，利用targetP对AnDHN蛋白的亚细胞分布进行预测。结果表明：AnDHN蛋白并无明显的信号肽，这暗示其不属于分泌蛋白，不能够进行独立跨膜运输；同时，targetP预测结果表明AnDHN蛋白可能分布于除了叶绿体，线粒体及高尔基体的其它亚细胞位置（图2-8）图2-4AnDHN亚细胞定位预测Fig.2-4PredictionofsubcellularlocalizationofAnDHN2.3.4AnDHN蛋白为膜蛋白通过绿色荧光蛋白和marker对AnDHN的亚细胞定位进行研究，首先选择构建好的表达载体pCAMBIA1302-AnDHN-GFP和PAD62细胞膜的位置标记marker，等比例混合后，注射烟草烟进行瞬时表达，使用共聚焦显微镜观察AnDHN蛋白的亚细胞定位情
【参考文献】：
期刊论文
[1]干旱胁迫及复水对大豆抗坏血酸-谷胱甘肽循环的影响[J]. 董守坤,马玉玲,李爽,董娜,刘丽君. 东北农业大学学报. 2018(01)
[2]新疆沙冬青引种栽培技术及园林应用初探[J]. 周禧琳,袁林. 塔里木大学学报. 2016(04)
[3]高粱ATP合成酶E亚基基因（SbATPase-E）的克隆及其抗逆功能研究[J]. 张静,张登峰,孙永华,李永祥,石云素,宋燕春,杜金友,王天宇,黎裕. 植物遗传资源学报. 2016(05)
[4]植物非生物胁迫的研究进展[J]. 于新海,李濛,周红昕. 农业与技术. 2016(09)
[5]濒危植物新疆沙冬青遗传多样性的RAPD分析[J]. 赵鹏,雍晓鹏,胡国臣,吕婷,焦培培. 干旱区资源与环境. 2016(03)
[6]转基因小麦中bar基因检测方法研究[J]. 李太强,高亚男,高居荣,王洪刚,李兴锋. 麦类作物学报. 2015(09)
[7]新疆沙冬青植物群落特征研究[J]. 麦尔哈巴·阿布拉,刘博,李征珍,杨琼,石莎,冯金朝. 中央民族大学学报(自然科学版). 2015(03)
[8]枇杷7个脱水素基因表达差异分析[J]. 徐红霞,李晓颖,陈俊伟,冯健君,徐昌杰. 园艺学报. 2014(08)
[9]珍稀濒危植物新疆沙冬青胚根愈伤组织诱导及植株再生[J]. 焦培培,王彦芹,祁正伟,张莉,康少峰,严建龙,李彬. 北方园艺. 2012(20)
[10]沙冬青属植物在亚洲中部荒漠区的潜在地理分布及驱动因子分析[J]. 马松梅,张明理,陈曦. 中国沙漠. 2012(05)
硕士论文
[1]小麦脱水素WDHN1基因的克隆及其功能分析[D]. 刘浩.西北农林科技大学 2016
[2]茶树脱水素基因结构与表达差异分析[D]. 陈静.安徽农业大学 2014
本文编号：3480828
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