夹心平板法在海洋沉积物细菌分离中的初步应用及两株新菌的多相分类
发布时间：2021-11-09 12:44
海洋环境是复杂多变的,其中存在着巨大的微生物资源。这些海洋微生物不仅在海洋生态系统和生物地球化学循环中起着至关重要的作用,而且是新型生物活性物质和先导化合物的重要来源之一。分离和鉴定海洋微生物资源,尤其是潜在的新物种的分离鉴定和研究是极其重要的。由于分离培养条件和技术的有限性,这些海洋微生物绝大多数是未被开发利用的,也没有获得菌株的纯培养物,因此,需要对现有分离培养条件进行改善和优化,开发新的分离培养方法,分离纯化出更多的以前未培养的微生物。本文以威海近海沉积物样品为研究对象,利用夹心平板法分离海洋沉积物中的微生物,进行微生物多样性的研究,并结合16S rRNA基因高通量测序技术分析可培养细菌的区系变化,筛选出依赖型菌株,围绕一株代表性菌株进行基因组和转录组的分析,探究依赖型菌株和助长菌株的促生机制。将海洋沉积物样品分为对照组A01、实验组A08、A38、A71和A72不同的处理组,进行微生物的分离培养工作,并结合16S rRNA基因高通量测序,分析可培养细菌区系的变化。选用四株助长菌,利用夹心平板法总共分离到447株细菌,分布于5个门,116个属,216个物种中,潜在新物种有156株...
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：113 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１沉积物样品采样点??Ｆｉｕｒｅ?２－１?Ｓｅｄｉｍｅｎｔ?ｓａｍｌｅ?ｓａｍｌｉｎｓｉｔｅ??
养基上，大约形成直径７０ｍｍ的区域，置于２８°Ｃ培养箱培养２天后，即在底层培??养基表面长出菌苔后待用。上层培养基是改良的１／〗〇?２２１６Ｅ培养基，经高温灭菌??后冷却至５０?°Ｃ左右后，倒入助长菌生长良好的底层培养基上，使得整个培养皿铺??满即可。２８?°Ｃ培养箱培养２天观察夹心培养基的情况。如有助长菌生长到夹心培??养基最上层或是有其他杂菌的生长，则说明此培养基被污染。选取表面无任何菌株??生长的培养基作为微生物分离过程中的分离培养基使用。另外，设计了一组对照组，??即在底层培养基和上层培养基中间没有任何助长菌的存在。夹心培养基的配制过??程如图２－２所示。??
文???表２－４不同分离培养基可培养细菌菌落计数??Ｔａｂｌｅ?２－４?Ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｃｏｌｏｎｉｅｓ?ｏｆ?ｃｕｌｔｕｒａｂｌｅ?ｂａｃｔｅｒｉａ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｉｓｏｌａｔｉｏｎ?ｍｅｄｉａ??不同处理组?菌落总数（／ｇ）???Ａ０１?１．６ｘｌ〇５??Ａ０８?２．５ｘｌ〇５??Ａ３?８?１．９ｘｌ０５??Ａ７１?９．５ｘｌ〇４??Ａ７２?１．４ｘｌ０５??泰Ｃ?Ｌａ?Ｘ?）??Ａ０１?Ａ０８?Ａ３８?Ａ７１?Ａ７２??图２－３不同分离培养基的细菌菌落形态??Ｆｉｇ?２－３?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｃｏｌｏｎｙ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｉｓｏｌａｔｉｏｎ?ｍｅｄｉａ??表２－Ｓ潜在新物种的分类地位??Ｔａｂｌｅ?２－５?Ｔｈｅ?ｔａｘｏｎｏｍｉｃ?ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｐｏｔｅｎｔｉａｌ?ｎｏｖｅｌ?ｓｐｅｃｉｅｓ??菌株编号?比对结果?相似度系统发育类群（门）??对照组Ａ０１??Ｃ０２?Ｌｕｔｅｉｍｏｎａｓ?ｐａｄｉｎａｅ?９７．９５％?Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ??Ｃ０３?Ｈａｌｏｃｙｎｔｈｉｉｂａｃｔｅｒ?ｎａｍｈａｅｎｓｉｓ?９７．６９％?Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ??Ｃ０９?Ｌｕｔｅｉｍｏｎａｓ?ｐａｄｉｎａｅ?９８．０５％?Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ??ＣＩＯ?Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ?ａｍｏｒｐｈａｅ?９８．２６％?Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ??Ｃ１１?Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ?ａｒｔｈｒｏｓｐｈａｅｒａｅ?９８．２１?％?Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ??Ｃ１２?Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｖｉ
【参考文献】：
期刊论文
[1]海洋放线菌Streptomyces sp.MDW-06中1个新的聚酮类化合物[J]. 王聪,邱子言,雷福厚,谭学才,姜明国,李浩,李小燕. 中国中药杂志. 2019(10)
[2]海洋动物来源微生物分离培养的新方法[J]. 陈雷,毕洪玉,王婉莹,王光玉. 微生物学通报. 2018(09)
[3]未培养微生物原位培养技术研究进展[J]. 张作艳,丁立建,何山. 天然产物研究与开发. 2018(05)
[4]从环境中分离培养微生物:培养基营养水平至关重要[J]. 周楠,姜成英,刘双江. 微生物学通报. 2016(05)
[5]微生物共培养技术的研究进展[J]. 徐德阳,王莉莉,杜春梅. 微生物学报. 2015(09)
[6]海洋微生物多样性及其分子生态学研究进展[J]. 李祎,郑伟,郑天凌. 微生物学通报. 2013(04)
[7]海洋微生物多样性的研究进展[J]. 孙昌魁,冯静,马桂荣. 生命科学. 2001(03)
本文编号：3485368
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：113 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１沉积物样品采样点??Ｆｉｕｒｅ?２－１?Ｓｅｄｉｍｅｎｔ?ｓａｍｌｅ?ｓａｍｌｉｎｓｉｔｅ??
养基上，大约形成直径７０ｍｍ的区域，置于２８°Ｃ培养箱培养２天后，即在底层培??养基表面长出菌苔后待用。上层培养基是改良的１／〗〇?２２１６Ｅ培养基，经高温灭菌??后冷却至５０?°Ｃ左右后，倒入助长菌生长良好的底层培养基上，使得整个培养皿铺??满即可。２８?°Ｃ培养箱培养２天观察夹心培养基的情况。如有助长菌生长到夹心培??养基最上层或是有其他杂菌的生长，则说明此培养基被污染。选取表面无任何菌株??生长的培养基作为微生物分离过程中的分离培养基使用。另外，设计了一组对照组，??即在底层培养基和上层培养基中间没有任何助长菌的存在。夹心培养基的配制过??程如图２－２所示。??
文???表２－４不同分离培养基可培养细菌菌落计数??Ｔａｂｌｅ?２－４?Ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｃｏｌｏｎｉｅｓ?ｏｆ?ｃｕｌｔｕｒａｂｌｅ?ｂａｃｔｅｒｉａ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｉｓｏｌａｔｉｏｎ?ｍｅｄｉａ??不同处理组?菌落总数（／ｇ）???Ａ０１?１．６ｘｌ〇５??Ａ０８?２．５ｘｌ〇５??Ａ３?８?１．９ｘｌ０５??Ａ７１?９．５ｘｌ〇４??Ａ７２?１．４ｘｌ０５??泰Ｃ?Ｌａ?Ｘ?）??Ａ０１?Ａ０８?Ａ３８?Ａ７１?Ａ７２??图２－３不同分离培养基的细菌菌落形态??Ｆｉｇ?２－３?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｃｏｌｏｎｙ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｉｓｏｌａｔｉｏｎ?ｍｅｄｉａ??表２－Ｓ潜在新物种的分类地位??Ｔａｂｌｅ?２－５?Ｔｈｅ?ｔａｘｏｎｏｍｉｃ?ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｐｏｔｅｎｔｉａｌ?ｎｏｖｅｌ?ｓｐｅｃｉｅｓ??菌株编号?比对结果?相似度系统发育类群（门）??对照组Ａ０１??Ｃ０２?Ｌｕｔｅｉｍｏｎａｓ?ｐａｄｉｎａｅ?９７．９５％?Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ??Ｃ０３?Ｈａｌｏｃｙｎｔｈｉｉｂａｃｔｅｒ?ｎａｍｈａｅｎｓｉｓ?９７．６９％?Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ??Ｃ０９?Ｌｕｔｅｉｍｏｎａｓ?ｐａｄｉｎａｅ?９８．０５％?Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ??ＣＩＯ?Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ?ａｍｏｒｐｈａｅ?９８．２６％?Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ??Ｃ１１?Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ?ａｒｔｈｒｏｓｐｈａｅｒａｅ?９８．２１?％?Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ??Ｃ１２?Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｖｉ
【参考文献】：
期刊论文
[1]海洋放线菌Streptomyces sp.MDW-06中1个新的聚酮类化合物[J]. 王聪,邱子言,雷福厚,谭学才,姜明国,李浩,李小燕. 中国中药杂志. 2019(10)
[2]海洋动物来源微生物分离培养的新方法[J]. 陈雷,毕洪玉,王婉莹,王光玉. 微生物学通报. 2018(09)
[3]未培养微生物原位培养技术研究进展[J]. 张作艳,丁立建,何山. 天然产物研究与开发. 2018(05)
[4]从环境中分离培养微生物:培养基营养水平至关重要[J]. 周楠,姜成英,刘双江. 微生物学通报. 2016(05)
[5]微生物共培养技术的研究进展[J]. 徐德阳,王莉莉,杜春梅. 微生物学报. 2015(09)
[6]海洋微生物多样性及其分子生态学研究进展[J]. 李祎,郑伟,郑天凌. 微生物学通报. 2013(04)
[7]海洋微生物多样性的研究进展[J]. 孙昌魁,冯静,马桂荣. 生命科学. 2001(03)
本文编号：3485368
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