携带NDV HN/F基因的重组减毒鸡白痢沙门菌构建及其特性
发布时间：2021-11-11 07:13
新城疫作为危害全球养禽业的烈性传染病之一,被世界动物卫生组织（OIE）划定为A类传染病。随着NDV变异毒株的不断出现,非典型性新城疫不断增多,鸡只免疫带毒现象普遍存在,因而大大限制了传统疫苗的使用。而DNA疫苗为新型新城疫疫苗的研制提供了新的思路,融合蛋白（F）和血凝素-神经氨酸酶蛋白（HN）基因作为新城疫病毒的主要保护性抗原基因,成为新城疫DNA疫苗的研究热点。目前鸡白痢沙门菌仍是危害我国养鸡业的主要致病菌之一,传统的药物治疗极易造成细菌耐药性的产生。沙门菌经基因工程减毒后,毒力显著降低,但仍具有良好的侵袭力和免疫原性,可为该病的防控提供一定的思路。减毒沙门菌可通过自然感染途径将真核质粒DNA携带进入宿主细胞内进行表达,从而能够有效地刺激机体产生黏膜免疫、细胞免疫和体液免疫应答,作为疫苗活载体具有广阔的应用前景。因此,本研究构建了减毒鸡白痢沙门菌平衡致死真核递呈系统及携带NDV HN/F基因的重组减毒鸡白痢沙门菌株,进一步研究了其生物学及免疫学特性。1.重组减毒鸡白痢沙门菌平衡致死真核表达系统的构建及其特性本试验以质粒pcDNA3.1-Zeo（+）为骨架,将氨苄抗性基因Amp替换为S...
【文章来源】：河南科技大学河南省
【文章页数】：111 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
NDV结构示意图(自引文[12]
肿瘤坏死因子、白细胞介素等细胞因子，能够特异性和选择性地杀伤和裂解肿瘤细胞，而对正常的体细胞不具有杀伤作用。目前，DV 抗多种肿瘤细胞的特性进行了较为深入的研究，如消化道肿神经母细胞瘤、肉瘤、恶性黑色素瘤、肾细胞瘤等，为肿瘤治疗及作用机制的研究奠定了基础[16]。2 NDV 的分子生物学特性1. NDV 基因组结构特征NDV 基因组全长约为 15 000 bp，为单股负链且不分节段的 RNA因(3'-N-P-M-F-HN-L-5')，依次编码 6 种结构蛋白 N、 P、M、 F 2 种非结构蛋白 V 和 W。在 NDV 感染细胞时，基因组转录产A，沉降系数分别为 18 S、22-28 S 和 35 S，其中 35 S mRNA 较为 蛋白；18S mRNA 几乎覆盖整个基因组，可编码 M、HN、F、N、最后一种 mRNA 由 P 基因经 RNA 剪辑后产生，编码 2 种非结构蛋]。
NDV 的致病性依赖于 HN 和 F 蛋白的相互作用，且两者均为 NDV 重要的宿主保护性抗原，因此两者共同构成了 NDV 致病性分子基础。在病毒感染过程中，HN 蛋白具有受体识别、神经氨酸酶活性等功能，在一定程度上影响 NDV的毒力。F 蛋白的感染性取决于无活性前体 F0的裂解效率，前体 F0裂解位点能够被宿主细胞蛋白酶特异性识别并裂解为 F1和 F2亚基。因此，F 蛋白的特异性裂解位点的裂解效率与病毒的毒力大小密切相关，常被作为衡量毒株毒力强弱的重要标志[76]。Marakami 等研究表明，单独的 HN 或 F 蛋白不能诱导宿主细胞发生融合作用，致病力不明显，只有同时存在 HN 和 F 蛋白时，宿主细胞中出现明显的合胞体，具有较强的致病性[77]。Morrison 等研究表明，HN 蛋白能够促 F 蛋白的细胞融合作用[78]。另有研究表明，鸡只感染 NDV 后，F 和 HN 蛋白的活性直接决定着 NDV 的毒力，并影响着巨噬细胞的生物学活性[71,72]。图 1-3 NDV 复制示意图 (自引文[12])Fig. 1-3 Schematic representation of Newcastle disease virus replication (From:[12])
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡新城疫的诊断与治疗[J]. 王一华. 山东畜牧兽医. 2017(02)
[2]新城疫和滑液囊支原体病对家禽养殖的影响及防控[J]. 毕英佐. 北方牧业. 2016(23)
[3]鸡新城疫的临床症状[J]. 李建伟,孙书刚,陈国信,张富刚,苏瑞. 畜牧兽医科技信息. 2015(09)
[4]新城疫的流行历史与现状[J]. 刘华雷,王志亮. 中国动物检疫. 2015(06)
[5]鸡免疫抑制的病因分析及防制对策[J]. 李光. 畜牧兽医科技信息. 2014(08)
[6]鸡白痢沙门菌C79-13ΔcrpΔasd平衡致死系统的构建及其生物学特性的研究[J]. 陈松彪,李静,尚珂,郁川,张春杰,程相朝,李银聚,赵战勤. 中国免疫学杂志. 2014(08)
[7]鸭源新城疫F基因和鸭圆环病毒Cap基因融合表达DNA疫苗的构建[J]. 许宗丽,谢芝勋,谢丽基,刘加波,邓显文,谢志勤,庞耀珊,范晴,罗思思. 西南农业学报. 2014(01)
[8]重组沙门菌疫苗研究进展[J]. 翁旭云,龚人杰,周慧莲. 青岛医药卫生. 2014(01)
[9]鼠伤寒沙门菌SL1344株ΔcrpΔasd缺失株的构建及生物学特性初步研究[J]. 田芳华,程相朝,张春杰,李银聚,李静,张明亮,李小康,李正,赵战勤. 中国兽医学报. 2013(11)
[10]表达PRRSV GP5蛋白重组减毒猪霍乱沙门菌C78-1的构建及生物学特性[J]. 张淼丹,张明亮,张俊峰,张春杰,程相朝,李银聚,何雷. 中国兽医科学. 2013(09)
博士论文
[1]基因Ⅶ型NDV强毒株反向遗传系统的建立及其应用研究[D]. 刘蒙蒙.中国农业大学 2015
[2]Ts-cystatin重组减毒沙门氏菌对小鼠相关免疫应答的影响[D]. 刘喜东.吉林大学 2014
[3]减毒沙门氏菌介导的罗非鱼源无乳链球菌sip基因口服核酸疫苗的研究[D]. 黄凌远.四川农业大学 2014
[4]新城疫病毒通过激活真核翻译起始因子4F促进病毒增殖[D]. 詹媛.中国农业科学院 2014
[5]新城疫病毒M蛋白功能结构域突变以及M蛋白与细胞核磷蛋白B23互作影响病毒复制的分子机制[D]. 段志强.扬州大学 2014
[6]口服沙门菌递送治疗性HBV-HSP70融合DNA疫苗的实验研究[D]. 刘泽.中国人民解放军军医进修学院 2011
[7]新城疫分离株P和HN基因分子进化与致病性的相关研究[D]. 梁俊文.山东师范大学 2010
[8]非抗性筛选生长抑素DNA疫苗的构建和免疫效力及安全性研究[D]. 梁爱心.华中农业大学 2009
[9]表达Tsol18抗原的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗的构建及其免疫学研究[D]. 丁军涛.中国农业科学院 2008
[10]鸡IL-18变构基因与新城疫病毒HN基因融合表达载体的构建及体外抗马立克病肿瘤细胞的研究[D]. 刘一尘.四川农业大学 2008
硕士论文
[1]表达鸡传染性喉气管炎病毒gI和gB基因的重组新城疫病毒的研究[D]. 孙娜娜.中国农业科学院 2015
[2]重组减毒沙门氏菌鸭瘟病毒DNA疫苗的构建及其口服免疫效果研究[D]. 刘雪燕.四川农业大学 2015
[3]旋毛虫Nudix水解酶DNA疫苗构建及其诱导的免疫保护[D]. 刘珮.郑州大学 2015
[4]基于内部核糖体进入位点提高重组NDV表达vvIBDV VP2基因的研究[D]. 何金娇.东北农业大学 2013
[5]基因Ⅶ型新城疫病毒DNA疫苗的构建及免疫效力研究[D]. 杨煦.哈尔滨师范大学 2012
[6]豫西地区PRRSV分子流行病学调查及重组ORF5减毒沙门氏菌的构建与鉴定[D]. 张明亮.河南科技大学 2012
[7]鸡白痢沙门菌S06004ΔspiC突变株的构建及其免疫生物学特性初步研究[D]. 刘男男.扬州大学 2012
[8]新城疫病毒分离鉴定与遗传进化分析[D]. 苏文政.山东农业大学 2011
[9]表达布氏杆菌sodc基因的重组沙门氏菌的构建及不同种布氏杆菌鉴别PCR检测方法的建立[D]. 刘新军.华中农业大学 2010
[10]新城疫病毒鸭源分离株NDV08-004微型基因组与全基因组的构建[D]. 管峰.扬州大学 2010
本文编号：3488427
【文章来源】：河南科技大学河南省
【文章页数】：111 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
NDV结构示意图(自引文[12]
肿瘤坏死因子、白细胞介素等细胞因子，能够特异性和选择性地杀伤和裂解肿瘤细胞，而对正常的体细胞不具有杀伤作用。目前，DV 抗多种肿瘤细胞的特性进行了较为深入的研究，如消化道肿神经母细胞瘤、肉瘤、恶性黑色素瘤、肾细胞瘤等，为肿瘤治疗及作用机制的研究奠定了基础[16]。2 NDV 的分子生物学特性1. NDV 基因组结构特征NDV 基因组全长约为 15 000 bp，为单股负链且不分节段的 RNA因(3'-N-P-M-F-HN-L-5')，依次编码 6 种结构蛋白 N、 P、M、 F 2 种非结构蛋白 V 和 W。在 NDV 感染细胞时，基因组转录产A，沉降系数分别为 18 S、22-28 S 和 35 S，其中 35 S mRNA 较为 蛋白；18S mRNA 几乎覆盖整个基因组，可编码 M、HN、F、N、最后一种 mRNA 由 P 基因经 RNA 剪辑后产生，编码 2 种非结构蛋]。
NDV 的致病性依赖于 HN 和 F 蛋白的相互作用，且两者均为 NDV 重要的宿主保护性抗原，因此两者共同构成了 NDV 致病性分子基础。在病毒感染过程中，HN 蛋白具有受体识别、神经氨酸酶活性等功能，在一定程度上影响 NDV的毒力。F 蛋白的感染性取决于无活性前体 F0的裂解效率，前体 F0裂解位点能够被宿主细胞蛋白酶特异性识别并裂解为 F1和 F2亚基。因此，F 蛋白的特异性裂解位点的裂解效率与病毒的毒力大小密切相关，常被作为衡量毒株毒力强弱的重要标志[76]。Marakami 等研究表明，单独的 HN 或 F 蛋白不能诱导宿主细胞发生融合作用，致病力不明显，只有同时存在 HN 和 F 蛋白时，宿主细胞中出现明显的合胞体，具有较强的致病性[77]。Morrison 等研究表明，HN 蛋白能够促 F 蛋白的细胞融合作用[78]。另有研究表明，鸡只感染 NDV 后，F 和 HN 蛋白的活性直接决定着 NDV 的毒力，并影响着巨噬细胞的生物学活性[71,72]。图 1-3 NDV 复制示意图 (自引文[12])Fig. 1-3 Schematic representation of Newcastle disease virus replication (From:[12])
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡新城疫的诊断与治疗[J]. 王一华. 山东畜牧兽医. 2017(02)
[2]新城疫和滑液囊支原体病对家禽养殖的影响及防控[J]. 毕英佐. 北方牧业. 2016(23)
[3]鸡新城疫的临床症状[J]. 李建伟,孙书刚,陈国信,张富刚,苏瑞. 畜牧兽医科技信息. 2015(09)
[4]新城疫的流行历史与现状[J]. 刘华雷,王志亮. 中国动物检疫. 2015(06)
[5]鸡免疫抑制的病因分析及防制对策[J]. 李光. 畜牧兽医科技信息. 2014(08)
[6]鸡白痢沙门菌C79-13ΔcrpΔasd平衡致死系统的构建及其生物学特性的研究[J]. 陈松彪,李静,尚珂,郁川,张春杰,程相朝,李银聚,赵战勤. 中国免疫学杂志. 2014(08)
[7]鸭源新城疫F基因和鸭圆环病毒Cap基因融合表达DNA疫苗的构建[J]. 许宗丽,谢芝勋,谢丽基,刘加波,邓显文,谢志勤,庞耀珊,范晴,罗思思. 西南农业学报. 2014(01)
[8]重组沙门菌疫苗研究进展[J]. 翁旭云,龚人杰,周慧莲. 青岛医药卫生. 2014(01)
[9]鼠伤寒沙门菌SL1344株ΔcrpΔasd缺失株的构建及生物学特性初步研究[J]. 田芳华,程相朝,张春杰,李银聚,李静,张明亮,李小康,李正,赵战勤. 中国兽医学报. 2013(11)
[10]表达PRRSV GP5蛋白重组减毒猪霍乱沙门菌C78-1的构建及生物学特性[J]. 张淼丹,张明亮,张俊峰,张春杰,程相朝,李银聚,何雷. 中国兽医科学. 2013(09)
博士论文
[1]基因Ⅶ型NDV强毒株反向遗传系统的建立及其应用研究[D]. 刘蒙蒙.中国农业大学 2015
[2]Ts-cystatin重组减毒沙门氏菌对小鼠相关免疫应答的影响[D]. 刘喜东.吉林大学 2014
[3]减毒沙门氏菌介导的罗非鱼源无乳链球菌sip基因口服核酸疫苗的研究[D]. 黄凌远.四川农业大学 2014
[4]新城疫病毒通过激活真核翻译起始因子4F促进病毒增殖[D]. 詹媛.中国农业科学院 2014
[5]新城疫病毒M蛋白功能结构域突变以及M蛋白与细胞核磷蛋白B23互作影响病毒复制的分子机制[D]. 段志强.扬州大学 2014
[6]口服沙门菌递送治疗性HBV-HSP70融合DNA疫苗的实验研究[D]. 刘泽.中国人民解放军军医进修学院 2011
[7]新城疫分离株P和HN基因分子进化与致病性的相关研究[D]. 梁俊文.山东师范大学 2010
[8]非抗性筛选生长抑素DNA疫苗的构建和免疫效力及安全性研究[D]. 梁爱心.华中农业大学 2009
[9]表达Tsol18抗原的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗的构建及其免疫学研究[D]. 丁军涛.中国农业科学院 2008
[10]鸡IL-18变构基因与新城疫病毒HN基因融合表达载体的构建及体外抗马立克病肿瘤细胞的研究[D]. 刘一尘.四川农业大学 2008
硕士论文
[1]表达鸡传染性喉气管炎病毒gI和gB基因的重组新城疫病毒的研究[D]. 孙娜娜.中国农业科学院 2015
[2]重组减毒沙门氏菌鸭瘟病毒DNA疫苗的构建及其口服免疫效果研究[D]. 刘雪燕.四川农业大学 2015
[3]旋毛虫Nudix水解酶DNA疫苗构建及其诱导的免疫保护[D]. 刘珮.郑州大学 2015
[4]基于内部核糖体进入位点提高重组NDV表达vvIBDV VP2基因的研究[D]. 何金娇.东北农业大学 2013
[5]基因Ⅶ型新城疫病毒DNA疫苗的构建及免疫效力研究[D]. 杨煦.哈尔滨师范大学 2012
[6]豫西地区PRRSV分子流行病学调查及重组ORF5减毒沙门氏菌的构建与鉴定[D]. 张明亮.河南科技大学 2012
[7]鸡白痢沙门菌S06004ΔspiC突变株的构建及其免疫生物学特性初步研究[D]. 刘男男.扬州大学 2012
[8]新城疫病毒分离鉴定与遗传进化分析[D]. 苏文政.山东农业大学 2011
[9]表达布氏杆菌sodc基因的重组沙门氏菌的构建及不同种布氏杆菌鉴别PCR检测方法的建立[D]. 刘新军.华中农业大学 2010
[10]新城疫病毒鸭源分离株NDV08-004微型基因组与全基因组的构建[D]. 管峰.扬州大学 2010
本文编号：3488427
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