家蝇Eiger单克隆抗体制备及抗逆功能研究
发布时间：2021-11-21 04:52
家蝇（Musca domestica）能在各类病原微生物滋生的恶劣环境中生存并不断繁殖,离不开其高效的先天免疫系统,研究其抗病机制对深入了解昆虫先天性免疫具有重要意义。在哺乳动物中,肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）家族成员是重要的炎性细胞因子,且进化非常保守。Eiger作为无脊椎动物TNF直系同源物最早在果蝇中被发现,并被证实在免疫应答中发挥一定作用。本实验室之前报道了一种家蝇的Eiger样基因MdEiger,此基因在家蝇幼虫受到细菌刺激后显著上调,并能协同Toll和IMD信号通路共同调控抗菌肽基因的表达和酚氧化物酶原的激活。本文基于上述的研究工作,对MdEiger在多种胁迫条件下的表达变化和组织定位进行了研究,研究结果如下:1.利用原核表达系统对MdEiger的TNF同源结构域部分进行了重组表达,并以重组产物rMdEiger为免疫原免疫小鼠,通过杂交瘤技术制备并获得4株抗rMdEiger单克隆抗体:2D9、2G8、3F4和4F6,抗体纯度、特异性和效价均符合Western Blot和免疫组化要求。2.Western Blot检测结果显示,细胞膜上检测...
【文章来源】：河北大学河北省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
果蝇体内微生物制剂的免疫识别(Buchonetal.,2014)
第一章前言5体介导的受体多聚反应中，因为两个JAKs距离足够近，足以进行反磷酸(Marreroetal.,2005)。活化的JAK使受体磷酸化，活化并磷酸化其主要底物STAT。磷酸化的STAT与具有保守SH2结构域的STAT家族的其他成员实现二聚化。然后二聚体转移到细胞核中，并与DNA序列的特定调节区结合，以激活或抑制诸如SOCS家族之类靶基因的转录(Gaoetal.,2005)。此外，JAK激酶是PI3K/AKT信号通路的激活剂，磷酸化的JAK可以激活PI3K，进而激活其下游级联(Gaoetal.,2018)。当机体受到局部压力或损害时细胞因子Upd3被激活，进而激活JAK-STAT途径(Buchonetal.,2009a;Jiangetal.,2009;Zhouetal.,2013)。果蝇JAK-STAT通路在中肠位置调节Drosomycin类3个抗菌肽的表达(Buchonetal.,2009b;Osmanetal.,2012)。在进食状态下，脂肪体分泌瘦素家族激素Upd2，也作为JAK-STAT通路的配体。这会影响大脑胰岛素的分泌，并直接在脂肪体和大脑之间传递代谢信息，从而影响生物体生长和能量代谢。JAK-STAT信号通路既参与代谢活动，又介导免疫防御(Buchonetal.,2014)。图1.2JAK/STAT途径(Xinetal.,2020)Fig1.2JAK/STATpathway1.2.4JNK途径IMD途径的免疫激发还激活了c-JunN末端激酶（c-JunN-terminalkinase,JNK）途径，两条通路的分支点出现在TAK1-TAB2复合物上，与Eiger/Wengen调控的TNF样信号级联相交(Silvermanetal.,2003;Boutrosetal.,2002;Parketal.,
第一章前言7图1.3Eiger/JNK途径(Igakietal.,2014)Fig1.3Eiger/JNKpathway1.3Eiger的生理作用1.3.1Eiger在痛觉敏化中的作用疼痛感觉神经元通常在炎症或组织损伤后敏感，这种对组织损伤的反应即痛觉敏感性对防止自身受伤至关重要(Goldetal.,2010)。这些变化促进了康复过程中的保护性戒断行为(Crooketal.,2014)。哺乳动物中细胞因子TNF及其受体TNFR与细胞凋亡和伤害性敏化有关(Bazzonietal.,1996;Cunhaetal.,1992;Vogeletal.,2006;Woolfetal.,1997)。实际上，暴露于紫外线下会导致人角质细胞合成并释放TNF(Dyetal.,1999;Kocketal.,1990)。TNF/TNFR的这种调节作用在系统发育上是保守的，它们介导了脊椎动物中各种类型的致敏作用(Vogeletal.,2006;Inglisetal.,2005;Cunhaetal.,2005;Zhangetal.,2011)。果蝇幼虫暴露于有害的热环境或机械刺激条件下时，会表现出与正常运动不同的反感反应：螺旋式滚动反应(Imetal.,2012)。这种伤害行为可以在一定温度范围内精确量化(Chattopadhyayetal.,2012)。在果蝇紫外线诱导的伤害性敏化过程中，细胞凋亡的表皮细胞会产生保守炎症细胞因子TNF/Eiger，Eiger不是通过其它细胞因子等介质的作用而是通过其受体TNFR/Wengen在伤害性感觉神经元中发挥作用，将热异常性疼痛撤回至先前的无害温度。在果蝇幼虫中，紫外线引
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cytokines,STATs and Liver Disease[J]. Bin Gao~(1,2) ~1Section on Liver Biology,Laboratory of Physiologic Studies,National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism,National Institutes of Health,Bethesda,MD 20892,USA;. Cellular & Molecular Immunology. 2005(02)
硕士论文
[1]家蝇Eiger/Wengen的免疫功能研究[D]. 李文倩.河北大学 2018
本文编号：3508809
【文章来源】：河北大学河北省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
果蝇体内微生物制剂的免疫识别(Buchonetal.,2014)
第一章前言5体介导的受体多聚反应中，因为两个JAKs距离足够近，足以进行反磷酸(Marreroetal.,2005)。活化的JAK使受体磷酸化，活化并磷酸化其主要底物STAT。磷酸化的STAT与具有保守SH2结构域的STAT家族的其他成员实现二聚化。然后二聚体转移到细胞核中，并与DNA序列的特定调节区结合，以激活或抑制诸如SOCS家族之类靶基因的转录(Gaoetal.,2005)。此外，JAK激酶是PI3K/AKT信号通路的激活剂，磷酸化的JAK可以激活PI3K，进而激活其下游级联(Gaoetal.,2018)。当机体受到局部压力或损害时细胞因子Upd3被激活，进而激活JAK-STAT途径(Buchonetal.,2009a;Jiangetal.,2009;Zhouetal.,2013)。果蝇JAK-STAT通路在中肠位置调节Drosomycin类3个抗菌肽的表达(Buchonetal.,2009b;Osmanetal.,2012)。在进食状态下，脂肪体分泌瘦素家族激素Upd2，也作为JAK-STAT通路的配体。这会影响大脑胰岛素的分泌，并直接在脂肪体和大脑之间传递代谢信息，从而影响生物体生长和能量代谢。JAK-STAT信号通路既参与代谢活动，又介导免疫防御(Buchonetal.,2014)。图1.2JAK/STAT途径(Xinetal.,2020)Fig1.2JAK/STATpathway1.2.4JNK途径IMD途径的免疫激发还激活了c-JunN末端激酶（c-JunN-terminalkinase,JNK）途径，两条通路的分支点出现在TAK1-TAB2复合物上，与Eiger/Wengen调控的TNF样信号级联相交(Silvermanetal.,2003;Boutrosetal.,2002;Parketal.,
第一章前言7图1.3Eiger/JNK途径(Igakietal.,2014)Fig1.3Eiger/JNKpathway1.3Eiger的生理作用1.3.1Eiger在痛觉敏化中的作用疼痛感觉神经元通常在炎症或组织损伤后敏感，这种对组织损伤的反应即痛觉敏感性对防止自身受伤至关重要(Goldetal.,2010)。这些变化促进了康复过程中的保护性戒断行为(Crooketal.,2014)。哺乳动物中细胞因子TNF及其受体TNFR与细胞凋亡和伤害性敏化有关(Bazzonietal.,1996;Cunhaetal.,1992;Vogeletal.,2006;Woolfetal.,1997)。实际上，暴露于紫外线下会导致人角质细胞合成并释放TNF(Dyetal.,1999;Kocketal.,1990)。TNF/TNFR的这种调节作用在系统发育上是保守的，它们介导了脊椎动物中各种类型的致敏作用(Vogeletal.,2006;Inglisetal.,2005;Cunhaetal.,2005;Zhangetal.,2011)。果蝇幼虫暴露于有害的热环境或机械刺激条件下时，会表现出与正常运动不同的反感反应：螺旋式滚动反应(Imetal.,2012)。这种伤害行为可以在一定温度范围内精确量化(Chattopadhyayetal.,2012)。在果蝇紫外线诱导的伤害性敏化过程中，细胞凋亡的表皮细胞会产生保守炎症细胞因子TNF/Eiger，Eiger不是通过其它细胞因子等介质的作用而是通过其受体TNFR/Wengen在伤害性感觉神经元中发挥作用，将热异常性疼痛撤回至先前的无害温度。在果蝇幼虫中，紫外线引
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cytokines,STATs and Liver Disease[J]. Bin Gao~(1,2) ~1Section on Liver Biology,Laboratory of Physiologic Studies,National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism,National Institutes of Health,Bethesda,MD 20892,USA;. Cellular & Molecular Immunology. 2005(02)
硕士论文
[1]家蝇Eiger/Wengen的免疫功能研究[D]. 李文倩.河北大学 2018
本文编号：3508809
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