基于肝脏特异性过表达小鼠模型开展UHRF蛋白家族的功能探索

发布时间：2021-12-16 00:22

　　哺乳动物UHRF家族蛋白包括UHRF1与UHRF2两个主要成员,UHRF家族蛋白在表观遗传学和细胞周期调控中起到重要作用,并且与肿瘤的发生发展具有很强的相关性。UHRF1与UHRF2在结构上具有很高的相似性,功能上既有相似性也有差异性,两者并不冗余。本课题利用Cre-Loxp体系构建了肝脏特异性过表达人源UHRF1/2小鼠模型（C57BL/6遗传背景）,对UHRF蛋白家族开展功能探索。肝脏特异性过表达UHRF1/2小鼠(UHRF1/2^{hep OE})能够正常生长与繁殖,基本形态正常。HE染色显示UHRF1/2^{hep OE}小鼠肝脏大小、形态正常。质谱结果表明UHRF2^{hep OE}小鼠肝脏的DNA甲基化与羟甲基化修饰水平与野生型小鼠无差异。采用经典的70%肝脏切除术构建肝脏再生模型,记录肝脏质量,检测肝脏再生指示蛋白PCNA等,Western Blot与IHC的结果表明过表达UHRF2不会对肝脏再生过程造成影响。UHRF2^{hep OE}小鼠也没有糖脂代谢的异常。研究发现UHRF1^{hep OE}

【文章来源】： 华东师范大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：86 页

【文章目录】：
内容摘要
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第一章 文献综述
    1.1 表观遗传学简介
    1.2 UHRF1 蛋白研究进展
        1.2.1 UHRF1 蛋白结构与功能
        1.2.2 UHRF1 与表观遗传调控
        1.2.3 UHRF1 与癌症
    1.3 UHRF2 蛋白研究进展
        1.3.1 UHRF2 蛋白结构与功能
        1.3.2 UHRF2 参与的生物学调控
    1.4 基因编辑小鼠
    1.5 肝脏相关研究概况
        1.5.1 肝脏再生的基本特征
        1.5.2 肝脏代谢
第二章 实验材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 引物
        2.1.3 抗体
    2.2 试剂与仪器
        2.2.1 主要试剂
        2.2.2 主要溶液与药品
        2.2.3 主要实验仪器
    2.3 常用溶液及其配制
    2.4 实验方法
        2.4.1 小鼠繁殖与饲养
        2.4.2 称重
        2.4.3 小鼠肝原代细胞的分离与培养
        2.4.4 血糖测定
        2.4.5小鼠肝脏部分切除实验
        2.4.6 小鼠基因型鉴定
        2.4.7腺病毒感染实验
        2.4.8 免疫荧光染色
        2.4.9 ALT-AST检测
        2.4.10 蛋白质印记实验
        2.4.11 小鼠肝脏组织基因组DNA抽提
        2.4.12 组织或细胞的RNA抽提
        2.4.13 逆转录实验
        2.4.14 免疫组织化学实验
        2.4.15 苏木精-伊红（HE）染色
第三章 实验结果
    3.1 基于UHRF2^{hep OE}小鼠模型进行功能探索
        3.1.1 UHRF1^f/f小鼠遗传背景纯化与鉴定
        3.1.2 获得UHRF2 基因肝脏特异性过表达小鼠
        3.1.3 UHRF^{2hep OE}小鼠的生长情况
        3.1.4 UHRF2 基因肝脏特异性过表达对肝脏再生无影响
        3.1.5 UHRF2 肝脏特异性过表达对肝脏基因组DNA甲基化与羟甲基无影响
    3.2 基于UHRF1hep OE小鼠模型进行功能探索
        3.2.1 UHRF1 基因肝脏特异性过表达（UHRF1hep OE）小鼠的鉴定与生长情况
        3.2.2 UHRF1 肝脏特异性过表达对肝脏代谢的影响
        3.2.3 UHRF1 肝脏特异性过表达影响肝脏糖脂代谢相关基因
第四章 讨论与展望
参考文献
附录 （缩略语）
在学期间所得的科研成果
致谢



本文编号：3537402