具有定向投放蛋白功能的铜绿假单胞菌工程菌的构建和评价

发布时间：2021-12-29 11:09

　　合成生物学旨在系统地设计和构建能够用于解决能源、环境和健康问题的新型生物系统,将这些生物系统组合在细菌中,通过控制细菌行为达到生产、医疗甚至抗肿瘤治疗等目的。本研究敲除铜绿假单胞菌PAO1基因组中pelF、pslA-B、pscF、fabV基因,构建四重基因突变菌株PAO1?4,以此为底盘生物,在其体内构建表达元件以及自裂解系统(细胞主动裂解机制:在菌株PAO1?4染色体中融合P_PA2069-prtN元件;细胞被动裂解机制:敲除菌株PAO1?4基因组中Pf4丝状噬菌体的完整编码基因簇),从而构建铜绿假单胞菌工程菌,作为定向投放蛋白的微生物工具。为了评价工程菌中构建的生物系统能否工作,本研究在其表达元件中表达胞外多糖水解酶PelA和PslG,构建了工程菌PAO1102。其工作原理为:在工程菌PAO1102生长时,在过表达系统作用下,大量表达并积累胞外多糖水解酶PelA和PslG;工程菌生长在稳定生长时期,当细胞密度达到阈值时,铜绿假单胞菌群体感应系统开始启动PA2069启动子表达溶菌素激活蛋白PrtN,PrtN激活细胞产生裂解蛋白而诱导工程菌裂解,使过表达的胞外多糖水... 

【文章来源】：延安大学陕西省

【文章页数】：96 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

铜绿假单胞菌工程菌构建流程图

具有定向投放蛋白功能的铜绿假单胞菌工程菌的构建和评价-15-图1-1铜绿假单胞菌工程菌构建流程图Figure1-1Flowchartofconstructionofpseudomonasaeruginosaengineeringbacteria图1-2工程菌检测方法Figure1-2Detectionmethodofengineeringbacteria

PAO1pelF突变株构建示意图

【参考文献】：
期刊论文
[1]铜绿假单胞菌铁摄取与生物被膜形成研究进展[J]. 于珊,马旅雁.  生物工程学报. 2017(09)



本文编号：3556006