紫红丝膜菌菌种发酵次级代谢产物及其抗菌活性研究
发布时间：2022-01-26 00:56
紫红丝膜菌（Cortinarius rufo-olivaceus（Pere.）Fr.）是主要生长在我国宁夏回族自治区和内蒙古自治区贺兰山上的一种非常稀有的大型可食用野生真菌资源。有研究报道该菌的次级代谢产物具有丰富的生物活性。但生于贺兰山上的大型真菌种类丰富,形态学特征相似,根据形态特征分类不够准确。且关于紫红丝膜菌的次级代谢产物和生物活性的研究目前全部集中在其子实体上。本实验运用表型分类法和基因型分类法两种方法对紫红丝膜菌进行了鉴定。并分离了紫红丝膜菌的菌种,通过对比筛选出最合适的培养基对其进行批量发酵培养,利用离心、抽滤、萃取及各种色谱技术将所得发酵液和菌丝分别进行提取分离,利用各种波谱技术对所得单体化合物进行结构鉴定。同时,对比了紫红丝膜菌子实体次级代谢产物与菌种发酵培养条件下次级代谢产物的异同,并对菌种发酵产物的各萃取物进行了抗菌活性测试,最终得到如下结果:1、通过对比文献中所描述的紫红丝膜菌的形态特征确定所采集到的大型真菌为紫红丝膜菌,利用ITS测序方法对其加以鉴定显示其与Cortinarius rufo-olivaceus TUB 011463具有99.57%的同源性进一步...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
紫红丝膜菌琼脂糖凝胶电泳检测结果（A：总DNA，B：PCR产物）
第3章紫红丝膜菌菌种发酵次级代谢产物研究34物Cr-15、Cr-17和Cr-18。3.4.5紫红丝膜菌发酵产物单体化合物的结构鉴定本实验中所得到的18个单体化合物的结构主要通过质谱和核磁共振谱等波谱数据鉴定，所需谱图委托中国科学院长春应用化学研究所进行打谱提供。3.5实验结果3.5.1培养基筛选经筛选发现不同培养基上紫红丝膜菌生长状态不同，色素物质产量不同。在燕麦汁培养基中，紫红丝膜菌色素产量高，前期以红色为主，后期紫色素含量增多，化合物种类丰富，菌液粘稠度高，前期菌丝生长较缓慢，后期菌丝含量增多但比较细碎，无大面积结团现象。在CD培养基中，紫红丝膜菌色素产量低，前期以淡橙色为主，生产缓慢，菌液粘稠度较低，固体培养基中前期菌丝生长快，菌丝无法直立，贴在培养基表面。在PD和PD+培养基中，色素生产较慢，以褐色为主，菌液粘稠度低，固体培养基上菌丝生长快且有结团现象。紫红丝膜菌在不同液体培养基中培养10d和30d前后状态如图3.1所示。在不同固体培养基中培养10d后菌丝状态如图3.2所示。图3.1紫红丝膜菌在不同液体培养基中培养10d、30d后发酵液状态（A：接种前培养基，B：培养10d后发酵液，C：培养30d后发酵液）Fig.3.1Fermentationbrothbeforeandafter10and30daysofcultureindifferentliquidmedia(A:medium,B:fermentationbrothafter10d,C:fermentationbrothafter30d)
第3章紫红丝膜菌菌种发酵次级代谢产物研究35图3.2紫红丝膜菌在不同固体培养基中培养10d后菌丝状态（A：PDA培养基，B：PDA+培养基，C：CDA培养基，D：OA培养基）Fig.3.2Myceliumstatusafter10daysofcultureindifferentsolidmedia(A:PDAmedium,B:PDA+medium,C:CDAmedium,D:OAmedium)3.5.2次级代谢产物比较经过薄层色谱结果发现不同配方培养基的发酵液萃取物、菌丝粗提物以及子实体粗提物的成分有所不同，子实体和发酵液的次级代谢产物成分差异相对较大，和菌丝体的次级代谢产物成分差异相对较校且所有石油醚相的成分很少，主要是一些小极性的脂肪酸类化合物，乙酸乙酯和正丁醇相次级代谢产物丰富。不同配方培养基的发酵液萃取物、菌丝粗提物中以燕麦汁培养基所产生的次级代谢产物最为丰富，也最接近子实体的代谢产物。3.5.3紫红丝膜菌批量发酵和提取经过对紫红丝膜菌的发酵产物进行提取萃取后分别得到液体培养基培养菌丝乙酸乙酯相24g、正丁醇相17g以及萃余水相浸膏42g，菌液乙酸乙酯相41g、正丁醇相33g和萃余水相浸膏58g，固体培养基培养乙酸乙酯相67g、正丁醇相55g和萃余水相浸膏83g。所有萃取物的薄层色谱结果显示液体培养基发酵的紫红丝膜菌的菌丝和发酵液中的次级代谢产物差别不大，而固体培养基培养的紫红丝膜菌的次级代谢产物与液体培养基培养的紫红丝膜菌次级代谢产物有所差别，固体培养基培养的紫
【参考文献】：
期刊论文
[1]食品中萜类化合物来源及功能研究进展[J]. 罗婧文,张玉,黄威,赵欣,曾凡坤. 食品与发酵工业. 2019(08)
[2]丝膜菌属真菌研究进展[J]. 李敏,姚庆智,魏杰,闫伟. 食用菌学报. 2018(03)
[3]真菌分类中分子生物学方法的原理及其应用[J]. 刘宁,金保伟,胡景辉,孙丽敏. 华北农学报. 2017(S1)
[4]紫色丝膜菌抗氧化及降低细胞内活性氧作用[J]. 王春颖,高杰,孟振晗,杨勇智,王旭,马超美. 食用菌学报. 2017(01)
[5]贺兰山野生丝膜菌种类、发生量和形态特征[J]. 贺永喜. 中国食用菌. 2017(02)
[6]贺兰山三种丝膜菌抗氧化活性的研究[J]. 白明生,张艳新,石新卫. 农业科学研究. 2015(04)
[7]贺兰山紫蘑菇萃取物抗肿瘤活性研究[J]. 方学原,鲍吉飞,苗艳霞,刘金宝,汪秀,朱红薇. 广州化工. 2015(12)
[8]贺兰山紫蘑体外氧化活性的初步研究[J]. 马茜,慕家琪,张自萍. 西北农业学报. 2013(03)
[9]真菌分类鉴定研究进展[J]. 朱研研,王耀耀,付美红,刘云清,郝惠云,王亚莉. 河北化工. 2010(04)
[10]中国食用菌名录[J]. 戴玉成,周丽伟,杨祝良,文华安,图力古尔,李泰辉. 菌物学报. 2010(01)
博士论文
[1]绞股蓝皂甙酸水解产物与紫色丝膜菌化学成分及其生物活性的研究[D]. 白明生.西北农林科技大学 2010
[2]四种内生真菌、一种放线菌和一种高等真菌次生代谢物质及生物活性研究[D]. 秦建春.西北农林科技大学 2009
硕士论文
[1]蓝色丝膜菌次生代谢产物及体外抗氧化活性研究[D]. 李杰.吉林大学 2019
[2]东北地区丝膜菌属资源及分类学研究[D]. 谢孟乐.吉林农业大学 2018
[3]土壤来源链霉菌KIB-H91的次级代谢产物研究[D]. 喻明明.湖北中医药大学 2015
[4]紫红丝膜菌子实体色素的化学成分及其应用研究[D]. 昝立峰.吉林农业大学 2007
本文编号：3609489
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
紫红丝膜菌琼脂糖凝胶电泳检测结果（A：总DNA，B：PCR产物）
第3章紫红丝膜菌菌种发酵次级代谢产物研究34物Cr-15、Cr-17和Cr-18。3.4.5紫红丝膜菌发酵产物单体化合物的结构鉴定本实验中所得到的18个单体化合物的结构主要通过质谱和核磁共振谱等波谱数据鉴定，所需谱图委托中国科学院长春应用化学研究所进行打谱提供。3.5实验结果3.5.1培养基筛选经筛选发现不同培养基上紫红丝膜菌生长状态不同，色素物质产量不同。在燕麦汁培养基中，紫红丝膜菌色素产量高，前期以红色为主，后期紫色素含量增多，化合物种类丰富，菌液粘稠度高，前期菌丝生长较缓慢，后期菌丝含量增多但比较细碎，无大面积结团现象。在CD培养基中，紫红丝膜菌色素产量低，前期以淡橙色为主，生产缓慢，菌液粘稠度较低，固体培养基中前期菌丝生长快，菌丝无法直立，贴在培养基表面。在PD和PD+培养基中，色素生产较慢，以褐色为主，菌液粘稠度低，固体培养基上菌丝生长快且有结团现象。紫红丝膜菌在不同液体培养基中培养10d和30d前后状态如图3.1所示。在不同固体培养基中培养10d后菌丝状态如图3.2所示。图3.1紫红丝膜菌在不同液体培养基中培养10d、30d后发酵液状态（A：接种前培养基，B：培养10d后发酵液，C：培养30d后发酵液）Fig.3.1Fermentationbrothbeforeandafter10and30daysofcultureindifferentliquidmedia(A:medium,B:fermentationbrothafter10d,C:fermentationbrothafter30d)
第3章紫红丝膜菌菌种发酵次级代谢产物研究35图3.2紫红丝膜菌在不同固体培养基中培养10d后菌丝状态（A：PDA培养基，B：PDA+培养基，C：CDA培养基，D：OA培养基）Fig.3.2Myceliumstatusafter10daysofcultureindifferentsolidmedia(A:PDAmedium,B:PDA+medium,C:CDAmedium,D:OAmedium)3.5.2次级代谢产物比较经过薄层色谱结果发现不同配方培养基的发酵液萃取物、菌丝粗提物以及子实体粗提物的成分有所不同，子实体和发酵液的次级代谢产物成分差异相对较大，和菌丝体的次级代谢产物成分差异相对较校且所有石油醚相的成分很少，主要是一些小极性的脂肪酸类化合物，乙酸乙酯和正丁醇相次级代谢产物丰富。不同配方培养基的发酵液萃取物、菌丝粗提物中以燕麦汁培养基所产生的次级代谢产物最为丰富，也最接近子实体的代谢产物。3.5.3紫红丝膜菌批量发酵和提取经过对紫红丝膜菌的发酵产物进行提取萃取后分别得到液体培养基培养菌丝乙酸乙酯相24g、正丁醇相17g以及萃余水相浸膏42g，菌液乙酸乙酯相41g、正丁醇相33g和萃余水相浸膏58g，固体培养基培养乙酸乙酯相67g、正丁醇相55g和萃余水相浸膏83g。所有萃取物的薄层色谱结果显示液体培养基发酵的紫红丝膜菌的菌丝和发酵液中的次级代谢产物差别不大，而固体培养基培养的紫红丝膜菌的次级代谢产物与液体培养基培养的紫红丝膜菌次级代谢产物有所差别，固体培养基培养的紫
【参考文献】：
期刊论文
[1]食品中萜类化合物来源及功能研究进展[J]. 罗婧文,张玉,黄威,赵欣,曾凡坤. 食品与发酵工业. 2019(08)
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[5]贺兰山野生丝膜菌种类、发生量和形态特征[J]. 贺永喜. 中国食用菌. 2017(02)
[6]贺兰山三种丝膜菌抗氧化活性的研究[J]. 白明生,张艳新,石新卫. 农业科学研究. 2015(04)
[7]贺兰山紫蘑菇萃取物抗肿瘤活性研究[J]. 方学原,鲍吉飞,苗艳霞,刘金宝,汪秀,朱红薇. 广州化工. 2015(12)
[8]贺兰山紫蘑体外氧化活性的初步研究[J]. 马茜,慕家琪,张自萍. 西北农业学报. 2013(03)
[9]真菌分类鉴定研究进展[J]. 朱研研,王耀耀,付美红,刘云清,郝惠云,王亚莉. 河北化工. 2010(04)
[10]中国食用菌名录[J]. 戴玉成,周丽伟,杨祝良,文华安,图力古尔,李泰辉. 菌物学报. 2010(01)
博士论文
[1]绞股蓝皂甙酸水解产物与紫色丝膜菌化学成分及其生物活性的研究[D]. 白明生.西北农林科技大学 2010
[2]四种内生真菌、一种放线菌和一种高等真菌次生代谢物质及生物活性研究[D]. 秦建春.西北农林科技大学 2009
硕士论文
[1]蓝色丝膜菌次生代谢产物及体外抗氧化活性研究[D]. 李杰.吉林大学 2019
[2]东北地区丝膜菌属资源及分类学研究[D]. 谢孟乐.吉林农业大学 2018
[3]土壤来源链霉菌KIB-H91的次级代谢产物研究[D]. 喻明明.湖北中医药大学 2015
[4]紫红丝膜菌子实体色素的化学成分及其应用研究[D]. 昝立峰.吉林农业大学 2007
本文编号：3609489
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