花脸香蘑培养条件的优化及其漆酶的研究
发布时间：2022-02-16 10:38
近年来,大量研究证实,大型真菌漆酶具有降解染料和农药的作用,在污水处理和环境修复方面具有广阔的应用前景。鉴于此,本研究以花脸香蘑菌株JZ05为试验材料,筛选并优化了该菌株的菌丝培养基配方和培养条件;优化了该菌株产漆酶的液体发酵条件;然后以花脸香蘑发酵液为粗酶液,利用离子交换层析等纯化方法,对花脸香蘑漆酶进行分离纯化与鉴定;最后研究了花脸香蘑发酵液和漆酶对染料的降解效果。通过以上试验,得出以下结论:1.花脸香蘑菌株JZ05母种的最适碳源为玉米粉,最适氮源为蛋白胨,培养基的最适碳氮比为40:1,菌丝最适生长温度为23℃,最适酸碱度为pH 7.0;花脸香蘑漆酶液体发酵的最佳条件为:最适转速150 rpm,最适接种量为12片0.5 mm菌片,最适培养温度27℃。在液体培养基中添加玉米粉可以提高漆酶的产量,且最适的玉米粉添加量为1.0 g/L。2.以花脸香蘑的液体发酵液作为粗酶液,通过优化DEAE-Sephadex弱阴离子交换层析、Q-Sepharose强阴离子交换层析、SP-Sepharose强阳离子交换层析等方法,得到电泳纯级别的花脸香蘑漆酶,SDS-PAGE检测显示为单一条带,根据标准蛋白...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1.引言
1.1 花脸香蘑概述
1.1.1 花脸香蘑生物学特征
1.1.2 花脸香蘑中的活性成分及药理作用
1.2 漆酶研究现状
1.2.1 漆酶的发现及功能
1.2.2 漆酶的机构及催化反应原理
1.2.3 漆酶的理化性质
1.2.4 漆酶的应用
1.3 蛋白质的纯化及鉴定概述
1.3.1 根据蛋白质带电性质不同进行分离
1.3.2 根据蛋白质溶解度不同进行分离
1.3.3 根据蛋白质分子大小不同进行分离
2 材料与方法
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 供试菌株
2.1.2 实验试剂
2.1.3 培养基及溶剂配制
2.1.4 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 菌株筛选与鉴定
2.2.2 花脸香蘑菌丝培养基配方及培养条件的优化
2.2.3 提高花脸香蘑漆酶产量的发酵条件的优化
2.2.4 花脸香蘑漆酶的分离纯化、鉴定及酶学特性研究
2.2.5 漆酶Lac-LS对染料的降解效果研究
3 结果与分析
3.1 菌种筛选与鉴定
3.1.1 漆酶高产菌株筛选
3.1.2 菌种鉴定
3.2 花脸香蘑菌丝培养基配方及培养条件的优化
3.2.1 花脸香蘑最适碳源的筛选
3.2.2 花脸香蘑最适氮源的筛选
3.2.3 花脸香蘑最适碳氮比的筛选
3.2.4 花脸香蘑最适培养温度的筛选
3.2.5 花脸香蘑最适pH的筛选
3.3 提高花脸香蘑漆酶产量的发酵条件的优化
3.3.1 转速对花脸香蘑发酵液漆酶产量的影响
3.3.2 温度对花脸香蘑发酵液漆酶产量的影响
3.3.3 接种量对花脸香蘑发酵液漆酶产量的影响
3.3.4 玉米粉对花脸香蘑发酵液漆酶产量的影响
3.3.5 铜离子对花脸香蘑发酵液漆酶产量的影响
3.4 花脸香蘑漆酶的分离纯化、鉴定及酶学特性研究
3.4.1 DEAE-Sephadex弱阴离子交换层析
3.4.2 Q-Sepharose强阴离子交换层析
3.4.3 SP-Sepharose强阳离子交换层析
3.4.4 SDS-PAGE凝胶电泳检测
3.4.5 花脸香蘑漆酶的分子量测定
3.4.6 漆酶Lac-LS内部肽段序列测定及分析
3.4.7 漆酶Lac-LS的 N端序列测定及分析
3.4.8 gene4851 基因和gene4851 漆酶的分析
3.4.9 花脸香蘑漆酶 Lac-LS 酶学特性分析
3.5 漆酶Lac-LS对染料的降解实验结果
3.5.1 发酵液与漆酶Lac-LS对染料的降解效果
3.5.2 漆酶Lac-LS对染料的降解效果
3.5.3 漆酶Lac-LS降解染料的HPLC检测结果
4 讨论
5 结论
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]一株产漆酶细菌的筛选鉴定及其漆酶对染料废水的脱色研究[J]. 李雪英,王建蝶,黄毕生,朱丹,廖少华,陈贵元. 昆明理工大学学报(自然科学版). 2019(05)
[2]刺芹侧耳产漆酶条件优化及对偶氮染料甲基橙的脱色[J]. 谭小珊,王帅杰,吴科元,齐鹏,胡佩雯,张静. 菌物学报. 2019(10)
[3]浅谈漆酶-介体系统在染料降解中的应用研究[J]. 刘友勋,张坤,宋相儒,陈莹莹,黄娟. 科技与创新. 2019(12)
[4]一株野生香蘑属真菌的鉴定及其生物学性质[J]. 王红艳,孔维祎,王竹青,孟德龙,丁强,王鸿磊. 贵州农业科学. 2019(06)
[5]核桃细菌性黑斑病菌分泌蛋白质的理化性质及特征分析[J]. 祝友朋,韩长志,熊智. 江苏农业学报. 2019(02)
[6]高含量漆酶食用菌菌渣的筛选及其染料脱色作用[J]. 刘子璐,孙悦,张国庆,陈青君,徐鑫,胡渤洋,关体坤,李晓祯. 应用与环境生物学报. 2019(06)
[7]漆酶对活性染料模拟废液的催化脱色性能研究[J]. 陈荣平,翦育林,陈镇,汪南方,周文常. 湖南工程学院学报(自然科学版). 2018(03)
[8]云南1株香蘑属野生菌株的分离鉴定及其原种培养基的筛选[J]. 岳万松,马明,杨珍福,郭相,周汐,桂明英. 中国食用菌. 2018(04)
[9]泰山花脸香蘑的生物学特性研究[J]. 崔晓,王庆武,安秀荣,唐丽娜. 食药用菌. 2017(06)
[10]花脸香蘑液体发酵液抗菌活性研究[J]. 张丽丽,王兰英,唐萌,杨海茹,胡玲,蔡佳旋,黄艳怡. 湖北农业科学. 2017(18)
博士论文
[1]蛋白质超滤分离的机理及其应用研究[D]. 王晶冰.中国石油大学 2011
[2]粗毛栓菌Trametes hirsuta lg-9非典型漆酶的研究[D]. 张海波.山东大学 2010
硕士论文
[1]白腐菌Pleurotus ostreatus漆酶纯化和酶学性质研究[D]. 马倩倩.辽宁工业大学 2019
[2]花脸香蘑的液体发酵条件筛选及多糖提取方法优化[D]. 唐萌.吉林大学 2017
[3]花脸香蘑液体发酵及其多糖的提取和免疫活性初步研究[D]. 刘法显.黑龙江八一农垦大学 2016
[4]黑木耳蛋白质的提取、分离纯化及特性研究[D]. 林洋.东北林业大学 2016
[5]银杏种仁抑菌蛋白的提取分离及抑菌性研究[D]. 华菁.南京林业大学 2014
[6]铜离子诱导白腐菌高产漆酶及其用于降解染料的研究[D]. 张丽.华南理工大学 2013
[7]3种食用菌活性物质的分离纯化及结构分析[D]. 吴小君.福建师范大学 2013
[8]花脸香蘑田间栽培、营养评价及液体发酵特性研究[D]. 胡先运.贵州师范大学 2007
本文编号：3627819
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1.引言
1.1 花脸香蘑概述
1.1.1 花脸香蘑生物学特征
1.1.2 花脸香蘑中的活性成分及药理作用
1.2 漆酶研究现状
1.2.1 漆酶的发现及功能
1.2.2 漆酶的机构及催化反应原理
1.2.3 漆酶的理化性质
1.2.4 漆酶的应用
1.3 蛋白质的纯化及鉴定概述
1.3.1 根据蛋白质带电性质不同进行分离
1.3.2 根据蛋白质溶解度不同进行分离
1.3.3 根据蛋白质分子大小不同进行分离
2 材料与方法
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 供试菌株
2.1.2 实验试剂
2.1.3 培养基及溶剂配制
2.1.4 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 菌株筛选与鉴定
2.2.2 花脸香蘑菌丝培养基配方及培养条件的优化
2.2.3 提高花脸香蘑漆酶产量的发酵条件的优化
2.2.4 花脸香蘑漆酶的分离纯化、鉴定及酶学特性研究
2.2.5 漆酶Lac-LS对染料的降解效果研究
3 结果与分析
3.1 菌种筛选与鉴定
3.1.1 漆酶高产菌株筛选
3.1.2 菌种鉴定
3.2 花脸香蘑菌丝培养基配方及培养条件的优化
3.2.1 花脸香蘑最适碳源的筛选
3.2.2 花脸香蘑最适氮源的筛选
3.2.3 花脸香蘑最适碳氮比的筛选
3.2.4 花脸香蘑最适培养温度的筛选
3.2.5 花脸香蘑最适pH的筛选
3.3 提高花脸香蘑漆酶产量的发酵条件的优化
3.3.1 转速对花脸香蘑发酵液漆酶产量的影响
3.3.2 温度对花脸香蘑发酵液漆酶产量的影响
3.3.3 接种量对花脸香蘑发酵液漆酶产量的影响
3.3.4 玉米粉对花脸香蘑发酵液漆酶产量的影响
3.3.5 铜离子对花脸香蘑发酵液漆酶产量的影响
3.4 花脸香蘑漆酶的分离纯化、鉴定及酶学特性研究
3.4.1 DEAE-Sephadex弱阴离子交换层析
3.4.2 Q-Sepharose强阴离子交换层析
3.4.3 SP-Sepharose强阳离子交换层析
3.4.4 SDS-PAGE凝胶电泳检测
3.4.5 花脸香蘑漆酶的分子量测定
3.4.6 漆酶Lac-LS内部肽段序列测定及分析
3.4.7 漆酶Lac-LS的 N端序列测定及分析
3.4.8 gene4851 基因和gene4851 漆酶的分析
3.4.9 花脸香蘑漆酶 Lac-LS 酶学特性分析
3.5 漆酶Lac-LS对染料的降解实验结果
3.5.1 发酵液与漆酶Lac-LS对染料的降解效果
3.5.2 漆酶Lac-LS对染料的降解效果
3.5.3 漆酶Lac-LS降解染料的HPLC检测结果
4 讨论
5 结论
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]一株产漆酶细菌的筛选鉴定及其漆酶对染料废水的脱色研究[J]. 李雪英,王建蝶,黄毕生,朱丹,廖少华,陈贵元. 昆明理工大学学报(自然科学版). 2019(05)
[2]刺芹侧耳产漆酶条件优化及对偶氮染料甲基橙的脱色[J]. 谭小珊,王帅杰,吴科元,齐鹏,胡佩雯,张静. 菌物学报. 2019(10)
[3]浅谈漆酶-介体系统在染料降解中的应用研究[J]. 刘友勋,张坤,宋相儒,陈莹莹,黄娟. 科技与创新. 2019(12)
[4]一株野生香蘑属真菌的鉴定及其生物学性质[J]. 王红艳,孔维祎,王竹青,孟德龙,丁强,王鸿磊. 贵州农业科学. 2019(06)
[5]核桃细菌性黑斑病菌分泌蛋白质的理化性质及特征分析[J]. 祝友朋,韩长志,熊智. 江苏农业学报. 2019(02)
[6]高含量漆酶食用菌菌渣的筛选及其染料脱色作用[J]. 刘子璐,孙悦,张国庆,陈青君,徐鑫,胡渤洋,关体坤,李晓祯. 应用与环境生物学报. 2019(06)
[7]漆酶对活性染料模拟废液的催化脱色性能研究[J]. 陈荣平,翦育林,陈镇,汪南方,周文常. 湖南工程学院学报(自然科学版). 2018(03)
[8]云南1株香蘑属野生菌株的分离鉴定及其原种培养基的筛选[J]. 岳万松,马明,杨珍福,郭相,周汐,桂明英. 中国食用菌. 2018(04)
[9]泰山花脸香蘑的生物学特性研究[J]. 崔晓,王庆武,安秀荣,唐丽娜. 食药用菌. 2017(06)
[10]花脸香蘑液体发酵液抗菌活性研究[J]. 张丽丽,王兰英,唐萌,杨海茹,胡玲,蔡佳旋,黄艳怡. 湖北农业科学. 2017(18)
博士论文
[1]蛋白质超滤分离的机理及其应用研究[D]. 王晶冰.中国石油大学 2011
[2]粗毛栓菌Trametes hirsuta lg-9非典型漆酶的研究[D]. 张海波.山东大学 2010
硕士论文
[1]白腐菌Pleurotus ostreatus漆酶纯化和酶学性质研究[D]. 马倩倩.辽宁工业大学 2019
[2]花脸香蘑的液体发酵条件筛选及多糖提取方法优化[D]. 唐萌.吉林大学 2017
[3]花脸香蘑液体发酵及其多糖的提取和免疫活性初步研究[D]. 刘法显.黑龙江八一农垦大学 2016
[4]黑木耳蛋白质的提取、分离纯化及特性研究[D]. 林洋.东北林业大学 2016
[5]银杏种仁抑菌蛋白的提取分离及抑菌性研究[D]. 华菁.南京林业大学 2014
[6]铜离子诱导白腐菌高产漆酶及其用于降解染料的研究[D]. 张丽.华南理工大学 2013
[7]3种食用菌活性物质的分离纯化及结构分析[D]. 吴小君.福建师范大学 2013
[8]花脸香蘑田间栽培、营养评价及液体发酵特性研究[D]. 胡先运.贵州师范大学 2007
本文编号：3627819
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