APC/C-CDC20在中国卤虫胚胎滞育解除过程中的作用

发布时间：2022-12-06 21:45

　　中国卤虫（Artemia sinica）是一种广泛生活在高盐水体的小型甲壳动物,具有极强抗逆能力,在遇到不利环境时,能进入滞育阶段,形成特殊的滞育卵而暂时停滞发育,当环境适宜时能解除滞育重新发育,因其具有该项特点,已经成为发育生物学研究的实验生物。泛素化途径通过E1,E2,E3一系列酶的催化降解靶蛋白,APC/C是一个代表性的E3泛素连接酶,并通过26S蛋白酶体降解特定的有丝分裂调节因子。CDC20（cell division cycle 20）是后期促进复合物APC/C的两个辅酶因子之一,能在特定时间点结合并激活APC复合物而发挥作用,在指导细胞周期相关蛋白泛素化降解的过程中发挥重要的作用,保证正常的染色体分离。由于大部分的细胞周期相关蛋白都通过泛素化途径进行降解,CDC20在对细胞周期的调控作用起关键作用。然而,目前为止对As-CDC20在中国卤虫滞育卵重新发育的过程中对细胞周期的调控作用尚不清楚。在本研究中,首次成功克隆得到了As-cdc20长度为1842bp的基因全长,包括1512bp的开放阅读框,50 bp的5’UTR以及280 bp的3’-UTR,编码氨基酸503个,蛋白分... 

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1. 前言
    1.1 卤虫概述
        1.1.1 卤虫的分类及形态特征
        1.1.2 卤虫的发育过程
        1.1.3 卤虫的经济价值
    1.2 CDC20的结构特征
    1.3 CDC20的功能
        1.3.1 泛素化及APC/C复合物
        1.3.2 CDC20在细胞周期中的作用
    1.4 研究的目的及意义
2. 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 卤虫的孵化及培养
        2.1.2 主要药品及试剂
        2.1.3 主要设备仪器
    2.2 方法
        2.2.1 卤虫总RNA提取
        2.2.2 反转cDNA模板
        2.2.3 目的基因片段的扩增
        2.2.4 cDNA末端快速扩增（RACE）
        2.2.5 PCR产物的回收纯化与克隆
        2.2.6 As-cdc20的生物信息学分析
        2.2.7 原位杂交
        2.2.8 实时荧光定量PCR
        2.2.9 As-CDC20原核表达
        2.2.10 As-CDC20大量诱导及纯化
        2.2.11 免疫印迹试验
3. 结果
    3.1 As-cdc20基因全长的克隆
        3.1.1 As-cdc20 EST片段的获得
        3.1.2 As-cdc20基因 3’端序列的获得
        3.1.3 As-cdc20基因 5’端序列的获得
        3.1.4 As-cdc20基因全长序列
    3.2 As-cdc20生物信息学分析
    3.3 CDC20分子进化分析
    3.4 As-cdc20表达模式
        3.4.1 As-cdc20的表达部位
        3.4.2 As-cdc20的表达水平
    3.5 扩增As-cdc20开放阅读框
    3.6 As-CDC20重组蛋白的纯化
        3.6.1 As-CDC20重组蛋白的诱导表达
        3.6.2 检测As-CDC20重组蛋白可溶性
    3.7 As-CDC20抗体特异性鉴定
    3.8 Western blot检测As-CDC20蛋白的表达
        3.8.1 As-CDC20在中国卤虫不同发育时期的表达
        3.8.2 As-CDC20在不同盐度刺激下的表达
        3.8.3 As-CDC20在低温刺激下的表达
4. 讨论
    4.1 中国卤虫As-cdc20基因的结构特点及进化
    4.2 As-CDC20在中国卤虫各发育阶段的表达部位
    4.3 As-CDC20在中国卤虫各发育时期的表达
    4.4 As-CDC20在低温及高盐刺激下的表达
结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]不同品系卤虫卵的生物学测定值和营养组成分析[J]. 隋丽英,王娇.  天津科技大学学报. 2014(01)
[2]发育不同时期的中国卤虫总RNA提取方法[J]. 伊男,李楠.  安徽农学通报(下半月刊). 2009(02)
[3]Cloning and Expression Analysis of p26 Gene in Artemia sinica[J]. Lijuan JIANG~1, Lin HOU~(1*), Xiangyang ZOU2, Ruifeng ZHANG~1, Jiaqing WANG~1, We njing SUN~1, Xintao ZHAO~1, and Jialu AN~1 1 College of Life Sciences, Liaoning Normal University, Dalian 116029, China; 2 Department of Biology, Dalian Medical University, Dalian 116027, China.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2007(05)
[4]泛素连接酶APC/C在细胞周期调控中的作用[J]. 焦延延,王欣,黄秉仁.  医学研究杂志. 2007(05)
[5]卤虫的生殖途径和影响因素[J]. 鲍鹰,逄少军.  海洋科学. 2007(02)
[6]中国卤虫actin基因的实时荧光定量PCR方法的建立和优化[J]. 侯林,姜丽娟,孙文静,张瑞锋,王家庆,赵欣涛,安家璐.  辽宁师范大学学报(自然科学版). 2006(04)
[7]卤虫的生物学研究[J]. 侯林,邹向阳,姚锋.  生物学通报. 2005(07)
[8]6个不同产地卤虫生物学特性的研究[J]. 杨志强,姚东瑞,魏文志.  扬州大学学报. 2005(02)
[9]卤虫属分类研究进展[J]. 黄旭雄,陈马康.  上海水产大学学报. 2000(02)
[10]用RAPD和AFLP的方法对中国卤虫 （Artemia）种及亲缘关系的研究[J]. 孙易,宋文芹,钟贻诚,张闰生,陈瑞阳.  遗传学报. 2000(03)



本文编号：3711686