PDK1蛋白激酶对成骨细胞增殖的影响

发布时间：2023-03-21 11:01

　　目的:在细胞水平探讨PDK1对成骨细胞增殖过程的影响及其可能的影响机制,为了解成骨细胞增殖分化具体机制提供理论基础。方法:选用小鼠成骨细胞前体细胞系MC3T3-E1为研究对象,建立体外培养模型。将细胞分为三个培养组:C组,培养基为完全培养基;P+组,培养基为完全培养基+PDK1激活剂(10nM);P-组,培养基为完全培养基+PDK1抑制剂(10nM)。按以下顺序进行培养和相关检测:(1)成骨细胞培养体系鉴定:MC3T3-E1细胞系进行普通培养72h后,进行ALP染色;培养14天后,进行矿化结节染色。(2)对数增长期的确定:C组、P+组和P-组分别于24h、48h、72h、96h和120h进行细胞增殖检测。(3)C组、P+组和P-组在培养72h后进行免疫荧光染色。(4)C组、P+组和P-组在培养72h后进行碘化丙啶染色,然后用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况。(5)C组、P+组和P-组在培养72h后进行mRNA提取,RT-PCR法检测Runx2和c-fos的表达。结果:(1)MC3T3-E1细胞系可以成功向成骨细胞分化。(2)72h时,C组、P+组和P-组细胞均处于对数增长期。(3)...

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
1.前言
2.文献综述
    2.1 骨组织
    2.2 成骨细胞
        2.2.1 成骨细胞与骨疾病
        2.2.2 成骨细胞的形态和结构
        2.2.3 成骨细胞的发育过程
        2.2.4 成骨细胞增殖相关因素
    2.3 Runx2
        2.3.1 Runx2 的结构
        2.3.2 Runx2 与成骨细胞
    2.4 c-fos
        2.4.1 c-fos的结构
        2.4.2 c-fos与成骨细胞
    2.5 PDK1
        2.5.1 PDK1 的结构
        2.5.2 PDK1 的功能
        2.5.3 PDK1对AGC家族激酶的调节
        2.5.4 PI3K/PDK1/Akt信号通路
        2.5.5 PDK1 抑制剂和激活剂
3.实验对象及方法
    3.1 实验材料和主要试剂
        3.1.1 实验对象
        3.1.2 主要试剂及试剂来源
        3.1.3 主要仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 实验分组及干预
        3.2.3 PDK1 抑制剂和激活剂的制备
        3.2.4 磷酸缓冲盐溶液制备
        3.2.5 ALP染色
        3.2.6 矿化结节染色
        3.2.7 CCK8 细胞增殖检测
        3.2.8 细胞周期检测
        3.2.9 细胞骨架染色
        3.2.10 mRNA相对表达量检测
    3.3 数据分析
4.实验结果
    4.1 成骨细胞鉴定
    4.2 增殖曲线
    4.3 细胞免疫荧光染色
    4.4 细胞周期分布
    4.5 细胞凋亡情况
    4.6 Runx2的mRNA表达情况
    4.7 c-fos的 mRNA表达情况
5.分析与讨论
    5.1 PDK1 影响成骨细胞增殖
    5.2 PDK1 影响成骨细胞增殖期Runx2 mRNA的表达
    5.3 PDK1 影响成骨细胞增殖期c-fos mRNA的表达
结论与展望
参考文献
攻读硕士学位期间科研工作
致谢



本文编号：3766898