禾谷镰孢组蛋白变体H2A.Z的功能研究

发布时间：2023-10-06 10:35

　　组蛋白变体H2A.Z在真核生物的多种生命活动中发挥重要的调控作用。目前,禾谷镰孢H2A.Z的功能及其调控机制尚未见研究报道。本研究通过生物信息学方法,确定了禾谷镰孢H2A.Z的编码基因为FgHtz1;利用基因敲除技术,获得了FgHtz1基因的敲除突变体;通过对突变体的表型和致病力进行分析,明确了禾谷镰孢H2A.Z在病菌生长、发育和致病过程中的功能。研究结果为阐明H2A.Z调控禾谷镰孢生长、发育和致病力的分子机制奠定了基础。主要结果如下:1.试验构建了禾谷镰孢FgHtz1基因的同源重组载体,利用PEG介导的原生质体转化技术转化禾谷镰孢野生型菌株PH-1,获得了草铵膦抗性的转化子;利用PCR和qRT-PCR技术对转化子进行鉴定,确定了所获得的阳性转化子为FgHtz1基因的敲除突变体,分别命名为AFgHtz1-1、AFgHtz1-2与AFgHtz1-3。2.对FgHtz1基因的敲除突变体的表型和致病力进行分析,发现突变体的生长速度减慢,色素产生较少,分生孢子变小且产量降低,对玉米的致病力减弱,表明禾谷镰孢H2A.Z参与病菌的生长、发育和致病力的调控过程。3.检测FgHtz1基因的敲除突变体对...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩写词表
1 引言
    1.1 禾谷镰孢及其危害
    1.2 表观修饰是调控基因表达的重要方式
    1.3 组蛋白变体的功能及其分子调控机制
        1.3.1 组蛋白变体H2A.X
        1.3.2 组蛋白变体macroH2A
        1.3.3 组蛋白变体H2Abd
        1.3.4 组蛋白变体H2A.Z
    1.4 本研究目的与意义
2 材料和方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 供试材料
        2.1.2 主要供试试剂、缓冲液及反应底物溶液
        2.1.3 主要仪器和设备
    2.2 试验方法
        2.2.1 禾谷镰孢H2A.Z的生物信息学分析
        2.2.2 禾谷镰孢基因组DNA的提取与纯化
        2.2.3 禾谷镰孢FgHtz1基因敲除载体的构建
        2.2.4 禾谷镰孢FgHtz1基因敲除突变体的构建
        2.2.5 禾谷镰孢FgHtz1基因敲除转化子的分子鉴定
        2.2.6 FgHtz1基因敲除突变体的表型分析
        2.2.7 FgHtz1基因敲除突变体的致病力测定
        2.2.8 FgHtz1基因敲除突变体对非生物胁迫的敏感性测定
3 结果与分析
    3.1 禾谷镰孢H2A.Z的生物信息学分析
        3.1.1 禾谷镰孢H2A.Z的系统进化分析
        3.1.2 禾谷镰孢H2A.Z的保守结构域分析
    3.2 禾谷镰孢FgHtz1基因敲除突变体的构建
        3.2.1 FgHtz1基因敲除载体的构建
        3.2.2 转化子的筛选与纯化
        3.2.3 转化子的分子鉴定
    3.3 禾谷镰孢FgHtz1基因突变对病菌生长、发育的影响
        3.3.1 突变体的生长速率测定
        3.3.2 突变体的菌落形态观察
        3.3.3 突变体的菌丝形态观察
        3.3.4 突变体的分生孢子形态观察
        3.3.5 突变体的产孢量测定
        3.3.6 突变体的生物产量测定
    3.4 禾谷镰孢FgHtz1基因突变对病菌致病力的影响
    3.5 禾谷镰孢FgHtz1基因突变对病菌响应非生物胁迫的影响
        3.5.1 突变体对渗透胁迫的敏感性测定
        3.5.2 突变体的细胞壁完整性分析
        3.5.3 突变体对氧胁迫的敏感性测定
4 讨论
    4.1 禾谷镰孢H2A.Z的功能及其调控机制
    4.2 组蛋白变体H2A.Z与染色质重塑复合物SWR1的关系
    4.3 组蛋白变体H2A.Z参与氧化胁迫响应过程
    4.4 今后的工作设想
5 结论
参考文献
作者简历
在读期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3851688