欧洲葡萄芪合酶基因的克

发布时间：2024-03-20 00:20

　　芪类化合物是植物体内一种重要的植保素,是作为植物参与应激反应、保护其免受外界环境包括微生物侵害的重要物质。芪合酶(stilbene synthase,STS)属于Ⅲ型聚酮化合物合酶(PKSIII)超家族,是芪类化合物合成的关键酶,其活性直接受制于芪合酶基因的活性和表达。自然界中存在两种类型的芪类化合物——白藜芦醇和赤松素。本课题采用白藜芦醇含量较高的欧洲葡萄作为研究材料,STS基因作为研究对象,利用反转录PCR方法,从欧洲葡萄叶片中分离得到了STS基因家族中的一个成员VvSTS6。通过对NCBI-UniGene数据库进行搜索,最终得到六个具有完整开放阅读框(ORF)的欧洲葡萄STS基因,查找与VvSTS6基因编码的氨基酸序列有较高相似性的其他物种STS氨基酸序列及其对应的基因编码区序列(CDS),并对以上这些基因序列以及氨基酸序列进行相关生物信息学分析,主要包括葡萄STS基因的生物信息学分析和不同物种STS基因的分子进化研究两部分内容:第一部分内容涵盖欧洲葡萄STS基因的理化性质、结构特征及其生化功能等方面的分析。结果表明葡萄STS家族蛋白各成员具有相同的保守结构域CHS-like,相...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 葡萄的生物学研究概况
    1.2 芪类化合物的研究进展
    1.3 芪类化合物的药理作用
    1.4 芪合酶基因的研究进展与应用现状
        1.4.1 芪合酶基因的发现与分类
        1.4.2 芪合酶的结构特征与功能
        1.4.3 芪合酶基因表达的研究进展
        1.4.4 芪合酶的基因工程研究
    1.5 生物信息学概述
    1.6 本课题研究的目的及意义
2 葡萄STS基因的克隆
    2.1 实验材料和仪器
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 溶液的配制
        2.1.3 主要实验仪器及设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 葡萄STS基因序列的获得
        2.2.2 葡萄STS基因的分子克隆
    2.3 实验结果与分析
        2.3.1 葡萄STS基因序列的获得
        2.3.2 葡萄STS基因的分子克隆
    2.4 本章小结
3 葡萄STS基因的生物信息学分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 结果与分析
        3.2.1 葡萄STS基因编码的氨基酸序列的理化性质分析
        3.2.2 葡萄STS氨基酸序列保守结构域、coiled-coil结构分析
        3.2.3 葡萄STS氨基酸序列功能位点的分析
        3.2.4 葡萄STS信号肽、跨膜结构域、亚细胞定位预测和分析
        3.2.5 葡萄STS疏水性/亲水性的预测和分析
        3.2.6 葡萄STS的二级结构预测
        3.2.7 葡萄STS的三级结构预测
        3.2.8 葡萄STS基因启动子顺式作用元件分析
        3.2.9 葡萄科植物STS氨基酸序列的比对及亲缘关系分析
    3.3 本章小结
4 不同物种STS基因的分子进化研究
    4.1 材料与方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 软件与方法
    4.2 结果与分析
        4.2.1 12种不同植物STS基因密码子适应指数分析
        4.2.2 不同物种STS多序列比对和系统进化分析
        4.2.3 不同物种STS保守结构域分析
    4.3 本章小结
5 不同胁迫处理后葡萄STS基因的表达
    5.1 材料处理
    5.2 实验方法
        5.2.1 葡萄RNA的提取、纯化及cDNA的合成
        5.2.2 引物设计
        5.2.3 实时定量PCR检测
    5.3 实验结果
        5.3.1 葡萄总RNA的琼脂糖凝胶电泳检测
        5.3.2 实时定量PCR检测
    5.4 结果分析
结论
参考文献
附录 高粱和花生的STS蛋白三级结构
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢



本文编号：3932684