喜盐草黄酮类化合物的提

发布时间：2017-05-26 09:15

  本文关键词：喜盐草黄酮类化合物的提取、纯化及抗氧化活性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：喜盐草(Halophila ovalis),多年浅海生沉水草本,属被子植物门,单子叶植物纲。隶属于沼生目((Helobiae),水鳖科Hydrocharitacea),喜盐草属(Halophila Thou.)。喜盐草是海草床的重要组成部分。目前,国内尚未有关于喜盐草黄酮的报道,对喜盐草的研究主要集中在分类学、形态学和生理学等方面。黄酮类化合物是一类自然界中广泛存在的化合物。研究表明,黄酮类化合物具有广泛的生物活性,包括抗氧化、抗衰老、抗突变、抗肿瘤、抗菌等。但是对于黄酮类化合物的研究一般只限于陆生高等植物,海洋中的高等植物尚并未被充分开发利用。本文将海洋高等植物喜盐草作为研究对象,主要研究其黄酮类化合物的提取工艺、纯化方法,并研究了喜盐草黄酮的抗氧化活性,主要研究结果如下：首先对喜盐草的基本成分进行了分析,发现喜盐草是一种蛋白含量高(11.66%)、低脂肪(1.16%)并且富含矿质元素(18.11%)的天然资源。在已测定的15中氨基酸中,必需氨基酸有7种,占氨基酸总量的34.70%。在必需氨基酸中,以缬氨酸含量最高,蛋氢酸含量最低。在非必需氨基酸中,谷氨酸含量最高,以组氨酸含量最低。呈味氨基酸丰富。其次进行了黄酮类化合物的提取试验。以乙醇作为浸提液,研究了传统工艺浸提法、超声辅助提取法和纤维素酶辅助提取法,通过单因素实验和正交试验得出这三种提取方法对喜盐草黄酮类化合物的最佳提取条件,并对其最大得率进行比较。传统浸提工艺最佳提取条件：乙醇浓度为65%,提取温度为70℃,提取时间为4h,料液比为1：40(g/mL),喜盐草的黄酮类化合物得率为1.28%。超声辅助提取工艺的最佳提取条件：乙醇浓度为55%,超声功率为420W,超声时间为8min,喜盐草的黄酮类化合物得率为1.73%。纤维素酶辅助提取工艺的最佳提取条件：酶解温度60℃,酶解pH为5.5,酶解时间60min,酶用量为3%,喜盐草黄酮类化合物的得率为2.10%。结果表明,纤维素酶辅助提取工艺优于其他两种工艺。利用有机溶剂萃取法得到了乙酸乙酯相和正丁醇相萃取物,后者黄酮纯度更高,且更符合黄酮的紫外吸收特征,所以作为分离纯化的主要研究对象。选择5种大孔吸附树脂,通过静态吸附和解吸实验,选定最优树脂AB-8；最后通过静态实验确定了最佳纯化工艺条件：样液pH为3,样液质量浓度为1.20mg/mL,吸附温度和解吸温度为25℃,洗脱液乙醇浓度为75%。在最佳纯化条件下,正丁醇相萃取物的黄酮类化合物纯度由原来的28.34%上升至47.28%,提高了1.7倍。经高效液相色谱法和电喷雾质谱鉴定,纯化后的喜盐草黄酮含有芹菜素-7-O-β-葡萄糖苷和柯伊利素-7-O-β-葡萄糖苷。文章最后研究了喜盐草乙酸乙酯萃取物、正丁醇相萃取物、大孔树脂纯化物与芹菜素-7-O-β-葡萄糖苷和柯伊利素-7-O-β-葡萄糖苷的抗氧化活性,主要包括还原能力、清除羟基自由基能力、清除超氧阴离子自由基能力、清除DPPH自由基和亚硝基能力的测定。两种黄酮单体的还原力略低于VC,说明还原力接近于VC。在清除超氧阴离子自由基、DPPH自由基和亚硝基的能力方面,从高到低依次是VC、两种黄酮单体、大孔树脂纯化物、正丁醇相萃取物和乙酸乙酯相萃取物。两种黄酮单体清除羟基自由基的能力均大于VC和其他样品,说明两种黄酮单体具有较强的清除羟基自由基的能力。研究结果表明,喜盐草黄酮具有抗氧化活性,表现为具有一定的清除自由基和亚硝基的能力。
【关键词】：喜盐草 黄酮 提取 纯化 抗氧化
【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：Q946
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 1 前言13-27
• 1.1 喜盐草简介13-14
• 1.1.1 海草的简介13
• 1.1.2 喜盐草的分类地位、形态特征和分布13-14
• 1.1.3 喜盐草的研究和利用现状14
• 1.2 黄酮类化合物的研究现状14-16
• 1.2.1 黄酮类化合物的结构和分类15
• 1.2.2 黄酮类化合物的理化性质15-16
• 1.3 黄酮类化合物的提取16-20
• 1.3.1 溶剂提取法16-17
• 1.3.2 超声波辅助浸提法17-18
• 1.3.3 微波辅助浸提法18
• 1.3.4 酶解法18
• 1.3.5 超临界二氧化碳萃取18-19
• 1.3.6 半仿生提取法19
• 1.3.7 膜分离法19-20
• 1.4 黄酮类化合物的分离纯化20-22
• 1.4.1 大孔树脂吸附法20
• 1.4.2 柱层析法20-21
• 1.4.3 有机溶剂萃取法21-22
• 1.4.4 高速逆流色谱(HSCCC)22
• 1.5 黄酮类化合物的分析鉴定22-23
• 1.5.1 紫外光谱(UV)22
• 1.5.2 平面色谱法22-23
• 1.5.3 高效液相色谱法(HPLC)23
• 1.6 黄酮类化合物的生理活性23-25
• 1.6.1 黄酮类化合物的抗氧化活性23-25
• 1.6.2 黄酮类化合物的抑菌活性25
• 1.6.3 黄酮类化合物的其他生理活性25
• 1.7 本文的研究目的和研究内容25-27
• 1.7.1 研究目的25-26
• 1.7.2 研究内容26-27
• 2 喜盐草的基本成分分析27-32
• 2.1 实验材料与仪器27
• 2.1.1 实验材料27
• 2.1.2 实验仪器27
• 2.2 实验方法27-29
• 2.2.1 水分含量的测定27-28
• 2.2.2 总糖含量的测定28
• 2.2.3 蛋白质含量的测定28
• 2.2.4 粗脂肪含量的测定28
• 2.2.5 灰分含量的测定28
• 2.2.6 氨基酸含量的测定28-29
• 2.3 实验结果29-30
• 2.4 讨论30-32
• 3 喜盐草中黄酮类化合物的提取工艺研究32-54
• 3.1 引言32
• 3.2 实验材料与试剂32-33
• 3.2.1 实验材料32
• 3.2.2 实验试剂32
• 3.2.3 实验仪器与设备32-33
• 3.3 实验方法33-39
• 3.3.1 黄酮类化合物的初步鉴定33
• 3.3.2 喜盐草黄酮类化合物含量的测定33-35
• 3.3.3 传统浸提工艺提取喜盐草黄酮类化合物的工艺研究35-36
• 3.3.4 超声辅助提取喜盐草黄酮类化合物工艺的研究36-38
• 3.3.5 纤维素酶辅助提取喜盐草黄酮工艺的研究38-39
• 3.4 实验结果与讨论39-54
• 3.4.1 黄酮的定性实验39
• 3.4.2 喜盐草黄酮测量方法的考察39-41
• 3.4.3 传统浸提工艺提取喜盐草黄酮类化合物的工艺研究41-45
• 3.4.4 超声辅助提取喜盐草黄酮类化合物工艺的研究45-49
• 3.4.5 纤维素酶辅助提取喜盐草黄酮类化合物工艺的研究49-53
• 3.4.6 提取工艺最优组合的比较53-54
• 4. 喜盐草中黄酮类化合物的分离与纯化54-71
• 4.1 引言54
• 4.2 实验材料与试剂54-55
• 4.2.1 实验材料54
• 4.2.2 实验试剂54-55
• 4.2.3 实验仪器与设备55
• 4.3 实验方法55-59
• 4.3.1 有机溶剂萃取法对喜盐草黄酮提取物的初步分离55-56
• 4.3.2 喜盐草各萃取相中黄酮含量的测定56
• 4.3.3 大孔吸附树脂选型及预处理56-57
• 4.3.4 大孔吸附树脂的静态实验57-58
• 4.3.5 不同条件下大孔吸附树脂对喜盐草黄酮样品纯化的影响58
• 4.3.6 工艺验证58-59
• 4.3.7 喜盐草正丁醇相经大孔树脂后纯化物的HPLC分析59
• 4.4 实验结果59-71
• 4.4.1 各萃取相中的黄酮纯度和紫外吸收扫描图59-60
• 4.4.2 大孔吸附树脂的筛选60-62
• 4.4.3 不同条件下大孔吸附树脂对喜盐草黄酮样品纯化的影响62-66
• 4.4.4 工艺验证实验66
• 4.4.5 经大孔树脂纯化后喜盐草黄酮的HPLC分析66-67
• 4.4.6 质谱分析67-71
• 5 喜盐草中黄酮类化合物的抗氧化活性研究71-81
• 5.1 引言71
• 5.2 实验材料与试剂71-72
• 5.2.1 实验材料71
• 5.2.2 实验试剂71-72
• 5.2.3 实验仪器与设备72
• 5.3 实验方法72-74
• 5.3.1 喜盐草黄酮总还原能力的测定72
• 5.3.2 清除羟基自由基能力的测定72
• 5.3.3 清除超氧阴离子自由基的能力的测定72-73
• 5.3.4 清除DPPH自由基的能力的测定73-74
• 5.3.5 清除亚硝基离子能力的测定74
• 5.4 结果与分析74-81
• 5.4.1 总还原力的测定74-75
• 5.4.2 清除羟基自由基能力的测定75-77
• 5.4.3 清除超氧阴离子自由基能力的测定77-78
• 5.4.4 清除DPPH自由基的能力的测定78-79
• 5.4.5 清除亚硝基离子能力的测定79-81
• 6. 总结和展望81-83
• 参考文献83-88
• 附录88-91
• 致谢91-92
• 个人简历92
• 研究生期间发表的研究成果92

【参考文献】

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  本文关键词：喜盐草黄酮类化合物的提取、纯化及抗氧化活性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：396355