hsa-miRNA-223-3p对人骨髓间充质干细胞成骨分化细胞影响的实验研究

发布时间：2025-01-06 03:29

　　目的:通过对人骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)的分离、纯化和鉴定,以及诱导BMSCs体外成骨分化,过表达hsa-miR-223-3p,探讨hsa-miR-223-3p对BMSCs成骨分化细胞的调控作用。方法:抽取新鲜人骨髓10 mL,通过肝素(2500 U/mL,0.5 mL)抗凝后注入预置有Percoll密度梯度离心液的试管内,通过Percoll密度梯度离心法来分离纯化单个核细胞。利用10%FBS DMEM完全培养基培养人骨髓间充质干细胞。结合免疫细胞化学检测鉴定贴壁的人骨髓间充质干细胞上相关表面抗原标志物的表达。使用含地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C的成骨诱导液诱导人BMSCs向成骨细胞分化。分别于细胞诱导培养的第7天、14天、21天,进行培养液ALP水平的检测以及细胞茜素红染色。在诱导成功的成骨细胞中,过表达hsa-miR-223-3p,通过实时荧光定量PCR方法检测Wnt信号通路标志物Wnt5a及其下游信号分子OPG、RUNX2的mRNA水平的变化。在蛋白水平上,通过Western blot方法检测Wnt5a、OPG和RUN...

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 分离人骨髓间充质干细胞,并进行免疫细胞化学检测鉴定
    材料与方法
    结果
    讨论
    结论
第二部分 hsa-miR-223-3p对人骨髓间充质干细胞成骨分化细胞的影响
    材料与方法
    结果
    讨论
    结论
第三部分 验证hsa-miR-223-3p与Wnt5a的靶定关系
    材料与方法
    结果
    讨论
    结论
全文结论
文章的不足之处
参考文献
英汉缩略词对照表
miRNA与Wnt信号通路调控成骨分化的研究进展(综述)
    参考文献
攻读硕士学位期间发表论文情况
致谢



本文编号：4023721