基于定点突变技术对苦荞麦胰蛋白酶抑制剂活性位点的研究

发布时间：2017-07-05 11:13

  本文关键词：基于定点突变技术对苦荞麦胰蛋白酶抑制剂活性位点的研究

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【摘要】：目的:为了研究胰蛋白酶抑制剂的活性位点,揭示Ft TI结构与功能的关系。将Ft TI和突变体aFtTI-R65L,aFtTI-D67V和aFtTI-R65L/D67V经IPTG诱导培养5h,收集菌液经过超声波破碎得到粗产物,经过纯化后的胰蛋白酶抑制剂对胰蛋白酶的摩尔抑制比分别为1∶1,1∶1.15,1∶1.3,1∶1.2;抑制常数Ki分别为1.62n M,1.69 n M,1.9 n M,1.8 n M(BAp NA作为底物)。结果:SDSPAGE分析表明突变前和突变后表达产物胰蛋白酶抑制剂的大小一致,均为9.5 k Da。对突变体aFtTI-R65L,aFtTI-D67V和aFtTI-R65L/D67V抑制反应温度研究表明,其最适反应温度均为40℃。在10~80℃保温30 min后,突变体对胰蛋白酶的抑制活性仍保留80%以上;在90℃保温30min,突变体的抑制活性开始显著下降,只保留其39%。具有较高的耐热性。将aFtTI在pH 3.0~10.0的不同缓冲溶液中放置30 min后,其抑制活性可保留90%左右,在pH 2.0条件下,aFtTI抑制活性丧失约31%;在pH 11.0条件下,aFtTI抑制活性丧失约43%。结论:对苦荞麦蛋白酶抑制剂Ft TI的定点突变并不会改变它是一种偏碱性的胰蛋白酶抑制剂的性质,突变前后均保持了耐碱性的特点。
【作者单位】： 四川农业大学生命科学学院;武汉生物工程学院生物科学与技术学院;
【关键词】： 苦荞麦 胰蛋白酶抑制剂 定点突变 表达 抑制活性
【基金】：四川省科技厅国际合作项目(2010hh0040)资助项目
【分类号】：Q946
【正文快照】： 目前苦荞在我国西南云贵川红土高原和北方黄土高原等一些高寒、边远、干旱的山区和少数民族聚居地广泛种植,是当地的主要粮食作物和经济作物。四川省凉山彝族自治州拥有最大面积、最集中分布的苦荞麦栽种区域,并且也是苦荞麦的发源地之一[1]。胰蛋白酶抑制(Trypsin inhibitor,

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本文编号：521719