线虫神经元中特异性基因表达系统的构建与应用

发布时间：2017-11-01 04:00

  本文关键词：线虫神经元中特异性基因表达系统的构建与应用

  更多相关文章： 线虫的神经元 基因表达 位点特异性重组酶系统

【摘要】：线虫是最富有成果的促进发育和神经系统的分子机制进步的模式生物,它已经成为科学家眼中的明星生物. 线虫全体透明简单,已经成为生物学研究中的无价的工具,主要在特异性靶标的功能特性的研究方面,这个已经用基因组学的方法确定.秀丽隐杆线虫和高等生物,线虫和高级的生物体,以及简单和农业的成本效益,使为一种有效的活体模型,它适合于全生物体高生产率化合物筛选和广泛目标验证.线虫神经系统是非常简单的,雌雄同体成虫仅302个神经元,其可分为运动神经元,感觉神经元和中间神经元.因此我们选择秀丽隐杆线虫作为我们工作的研究目标.在这里我们结合gateway技术以及位点特异性重组系统(Cre/loxP, FLP/FRT),荧光共聚焦显微镜来标记秀丽隐杆线虫的神经元。我们选择启动子的重叠区,从而能够通过不同的荧光蛋白来标记出神经元。此外我们运用了重组系统,能够运用两个启动子的重叠区和位点特异性重组酶系统(FLP/FRT, Cre/LoxP)标记单个神经元.我们已经构建质粒中包含FLP/FRT或者Cre/loxP特异的重组系统来研究两种启动子驱动的神经元的表达系统.我们也构建了质粒中含有(FLP/FRT和Cre/loxP)位点特异性重组系统来研究三个特异性启动子驱动的神经元的表达.此外,我们运用启动子库结合gateway的方法促进线虫神经元的研究.在这个模型中,我们不仅可以标记神经元而且可以建立一个线虫的神经元的三维重构图谱. 另一方面,被发现一些精彩的工具和技能为通过标志着该特定神经元构建质粒已经发现出来,尤其是该酶切法该组合和多站点重组技术,不仅显示该高效和在酶切无缝连接反应,但也需要多站点重组反应重复使用.与此同时,通过应用这种方法找到基因“的条件表达谱,进一步研究线虫神经元和基因的功能 在此方面,我们可以标记感觉神经元ASH和ASI,由启动子sra-6P和gpa-HP, rab-3P和gpa-4P的交叉点.我们可以标记的神经元ASH,由三个启动子的rab-3p交集,我们已经使用了第二个启动子和第三都是相同的(gba-4P)可以在单个神经元表达ASI,这样在神经元功能的进一步研究做铺垫.
【关键词】：线虫的神经元 基因表达 位点特异性重组酶系统
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：Q78
【目录】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• LIST OF CONTENTS11-13
• LIST OF FIGURES13-16
• LIST OF TABLES16-17
• CHAPTER ONE INTRODUCTION17-20
• CHAPTER TWO LITERATURE REVIEW20-54
• 2.1 OVERVIEW OF MODEL ORGANISM CELEGANS20
• 2.2 THE REASON FOR THE STUDY OF NEMATODES C.ELEGANS20-22
• 2.3 LABORATORY CULTURE OF C. ELEGANS22
• 2.4 LIFE CYCLES OF C. ELEGANS22-24
• 2.5 THE ONLINE INFORMATION RESOURCES FOR C. ELEGANS24-26
• 2.6 GENOME OF C. ELEGANS26-27
• 2.7 NEMATODES NERVOUS SYSTEM27-31
• 2.8 GENE EXPRESSION PROCESS31
• 2.9 TRANSGENIC RESEARCH METHODS NEMATODES31-34
• 2.10 NEURON-SPECIFIC MARKERS IN CELEGANSBODY34-36
• 2.11 SITE-SPECIFIC RECOMBINASE SYSTEM36-45
• 2.12 PUBLISHED EXAMPLES OF EXPRESSION FLP/FRT AND CRE/LOXP SYSTEM45-49
• 2.13 SL2 TRANS-SPLICING FACTORS49-50
• 2.14 NUCLEAR LOCALIZATION SIGNAL OR SEQUENCE(NLS)50-51
• 2.15 MULTISITE GATEWAY TECHNOLOGY51-54
• CHAPTER THREE MATERIALS AND METHODS54-92
• 3 MATERIALS AND METHODS54-92
• 3.1 MATERIALS54-58
• 3.2 METHODS58-92
• CHAPTER FOUR RESULTS AND DISCUSSION92-105
• 4.1 RESTRICTION DIGESTION METHODS COMBINED WITH MUL TISITE GATEWAYVECTOR92-93
• 4.2 PROMOTER DRIVEN THE EXPRESSION OF FLUORSCENT PROTEIN LABELEDNEURONS93-105
• CHAPTER FIVE CONCLUSION AND FUTURE WORK105-108
• CONCLUSIONS105-107
• FUTUR WORK107-108
• ACKNOWLEDGEMENTS108-109
• LIST OF ABBREVIATIONS109-111
• REFERENCES LIST111-125
• APPENDIX125-129
• LIST OF PUBLICATIONS129

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本文编号：1125108