S100钙离子结合蛋白A8在小鼠原始卵泡形成过程中的作用

发布时间：2017-07-08 00:16

  本文关键词：S100钙离子结合蛋白A8在小鼠原始卵泡形成过程中的作用

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【摘要】：在哺乳动物卵巢中,卵泡是构成卵巢的基本结构和功能单位。原始卵泡是卵泡的第一个发育阶段,也是成熟卵泡唯一的来源。所以原始卵泡库中原始卵泡的数量和数量的维持决定了雌性动物一生的生育能力。原始卵泡由单个的卵母细胞和包裹着它的单层的扁平前颗粒细胞构成。然而关于这两类细胞是如何组装形成原始卵泡的机制还不十分清楚。本研究采用原始卵泡大量形成前的19.0日胎龄(19.0 dpc)小鼠胚胎卵巢作为主要实验材料,通过对胚胎卵巢中细胞的迁移行为进行研究,对原始卵泡形成时期,卵母细胞与前颗粒细胞间相互作用的机制进行研究。首先,利用胚胎卵巢细胞体外重构卵泡模型,发现19.0 dpc卵巢组织经胰蛋白酶消化分离成单个卵母细胞和卵巢体细胞后,在体外经不同细胞密度培养的条件下,单个的卵母细胞和卵巢体细胞可以克服细胞间的空间距离,重新聚合形成原始卵泡样的细胞团块。证实了处于原始卵泡发生期的卵巢细胞具有可以移动的能力。之后,利用细胞迁移检测装置,发现19.0 dpc胚胎卵巢体细胞组分在胎牛血清处理条件下发生定向迁移；相反,同时期的卵母细胞组分则没有这种反应。进一步研究证实,该发育时期的卵母细胞具有与胎牛血清类似的吸引胚胎期卵巢体细胞迁移的功能,提示该发育时期的卵母细胞能够产生一种能够使OSCs定向迁移的物质。经小鼠胚胎卵巢不同发育阶段的趋化相关基因差异表达分析,发现S100钙离子结合蛋白A8(S100A8)可能是发挥此功能的物质。该基因属于钙离子结合蛋白超家族的趋化分子。经检测,Sl00a8特异表达于以生殖细胞合胞体形式存在的卵母细胞中。同时,经细胞迁移检测实验证明,S100A8能显著促进OSCs的迁移,特别是最终将构成原始卵泡的FOXL2阳性的前颗粒细胞的迁移。另一方面,利用胚胎卵巢细胞体外重构卵泡模型研究发现,S100A8特异性抗体可以剂量依赖性地抑制卵泡样细胞团块的形成。同时,通过向完整的17.5dpc卵巢中注射S1OOa8特异性干扰RNA,对S100a8的表达实现显著抑制的同时,也对原始卵泡的形成造成显著影响。综上所述,S100A8可能是一种由合胞体卵母细胞特异性表达并分泌到细胞外,募集具有形成原始卵泡能力的前颗粒细胞,前颗粒细胞继而与卵母细胞互作形成原始卵泡。本研究为原始卵泡形成过程中,卵母细胞与卵巢体细胞的互作机制研究提供了一个新的视角。
【关键词】：卵巢 原始卵泡 细胞迁移 S100a8
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：Q954.4
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 引言7-39
• 前言7-8
• 1.1 性腺的起源及早期发育8-15
• 1.1.1 生殖细胞的起源8-10
• 1.1.2 生殖嵴的发生10-12
• 1.1.3 原始生殖细胞的迁移与增殖12-15
• 1.2 性别的分化15-20
• 1.2.1 性别决定与分化15-18
• 1.2.2 生殖细胞的减数分裂18-20
• 1.3 原始卵泡的形成20-33
• 1.3.1 生殖细胞合胞体与第一次减数分裂前期的生殖细胞20-21
• 1.3.2 原始卵泡的形成21-23
• 1.3.3 原始卵泡形成过程中的卵母细胞凋亡23-26
• 1.3.4 原始卵泡形成的调控机制26-31
• 1.3.5 原始卵泡形成过程中的卵巢体细胞31-33
• 1.4 S100蛋白家族33-39
• 1.4.1 钙离子结合蛋白33
• 1.4.2 S100蛋白的结构特点33-35
• 1.4.3 S100a8的表达调控35-36
• 1.4.4 S100a8的功能36-38
• 1.4.5 S100蛋白与生殖38-39
• 第二章 研究正文39-73
• 2.1 材料与方法39-48
• 2.1.1 实验动物、仪器与试剂39-42
• 2.1.2 实验操作与统计方法42-48
• 2.2 结果48-69
• 2.2.1 卵巢细胞的迁移能力48-50
• 2.2.2 胚胎卵母细胞吸引OSCs发生定向迁移50-52
• 2.2.3 S100a8在胚胎及新生小鼠卵巢中的表达及定位52-56
• 2.2.4 S100a8对胚胎OSCs迁移行为的影响56-57
• 2.2.5 S100a8对卵泡形成的影响57-62
• 2.2.6 S100a9对胚胎卵巢发育可能的影响62-64
• 2.2.7 S100a8不通过T1r4和Ager发挥调控作用64-69
• 2.3 讨论69-73
• 2.3.1 梯度细胞密度实验的意义69-70
• 2.3.2 卵巢细胞的迁移行为70
• 2.3.3 S100a8的作用70-71
• 2.3.4 S100a9功能的空白71-72
• 2.3.5 S100蛋白受体72
• 2.3.6 展望72-73
• 第三章 结论73-75
• 参考文献75-89
• 附件1 间隙连接在原始卵泡形成过程中的作用相关工作89-126
• 附件2 qRT-PCR反应数据126-127
• 致谢127-129
• 个人简历129-131
• 博士研究生学习期间已发表文章131

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本文编号：532393