Rac1载体的构建及其对RAW264.7细胞生物学作用的影响

发布时间：2017-12-24 21:02

  本文关键词：Rac1载体的构建及其对RAW264.7细胞生物学作用的影响　出处：《江苏大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象,分析RAW264.7细胞的Rac1表达水平,通过构建Rac1载体和特异性si RNA探讨其对RAW264.7细胞生物学活性的影响,为进一步探讨Rac1的免疫调节作用奠定良好的基础。方法:(1)经反转录法克隆Rac1的c DNA并构建Rac1基因表达载体p CDNA3.1-Rac1,酶切鉴定并进行序列测定验证。(2)用脂质体将重组质粒p CDNA3.1-Rac1和si RNA转入RAW264.7,Western blot技术检测Rac1的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)测定Rac1 m RNA以及IL-1β、IL-6、IL-33和TNF-α的m RNA表达水平。(3)CCK-8法检测细胞的OD值来观察细胞的增殖情况。(4)Transwell法观察细胞的迁移能力。(5)流式细胞仪分析细胞表面膜分子CD80、CD86、MHCⅡ表达的改变。(6)酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-1β、IL-6、IL-33和TNF-α的蛋白表达水平。结果:(1)经测序等手段鉴定表明,Rac1载体构建成功,且将Rac1载体转入RAW264.7细胞可见其m RNA和蛋白表达均明显上调。(2)CCK-8法分析显示,随着Rac1的表达水平升高,细胞增殖能力增强。(3)Transwell结果表明,Rac1的表达水平与细胞迁移能力呈现正相关。(4)Rac1对RAW264.7细胞膜表面CD80、CD86和MHC-Ⅱ类分子的表达没有明显影响。然而,Rac1抑制剂及其特异性si RNA却可上调上述三种膜分子的表达。(5)Rac1转染的RAW264.7细胞,IL-1β、IL-6的m RNA和蛋白水平均显著低于si RNA处理组及Rac1抑制剂组,而IL-33、TNF-α的表达各组之间没有显著差异。结论:Rac1的表达有助于RAW264.7细胞的增殖和迁移,并能显著抑制IL-1β和IL-6的表达,而对细胞的抗原提呈作用无显著影响。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R392

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本文编号：1329937