自噬对酸敏感离子通道1a介导的大鼠关节软骨细胞凋亡的影响

发布时间：2017-12-25 06:17

  本文关键词：自噬对酸敏感离子通道1a介导的大鼠关节软骨细胞凋亡的影响　出处：《安徽医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： 酸敏感离子通道1a 类风湿性关节炎 大鼠关节软骨细胞 凋亡 自噬

【摘要】：目的类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种由多种原因引起的退行性关节疾病,但具体的发病机制尚不清楚。本课题组前期实验证实,酸敏感离子通道1a(acid-sensing ion channel 1a,ASIC1a)被胞外酸通过介导胞外Ca2+内流活化,且ASIC1a介导的关节软骨细胞凋亡在RA进展过程中发挥重要的作用。本研究主要目的是在体外探究自噬对ASIC1a介导的大鼠关节软骨细胞凋亡的影响,探讨自噬在RA发病进程中的作用。方法体外分离、提取及培养原代大鼠关节软骨细胞,给于适宜浓度的浓盐酸刺激,体外建立早期RA模型。在此基础上,采用ASIC1a特异性阻断剂狼蛛毒素(psalmotoxin 1,Pc TX1)及ASIC1a短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)阻断或沉默ASIC1a,实验分为正常组、p H6.0组、Pc TX1组、p H6.0+Pc TX1组和正常组、p H6.0组、ASIC1a sh RNA组、p H6.0+ASIC1a sh RNA组,分别观察ASIC1a对自噬和凋亡的影响。采用自噬特异性阻断剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)及Beclin1小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)阻断或沉默自噬,实验分为正常组、p H6.0组、,3-MA组、p H6.0+3-MA组和正常组、p H6.0组、Beclin1 si RNA组、p H6.0+Beclin1 si RNA组,观察自噬对ASIC1a介导的酸诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡的影响。透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)观察细胞内自噬小体;单丹黄酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色观察自噬囊泡的形成;GFP-m RFP-LC3观察自噬成熟过程;Western blot技术分析自噬相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达情况;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果胞外酸化可明显上调自噬蛋白LC3-II水平,显著增加胞质内自噬小体数量;胞外酸化(p H6.0)3h自噬蛋白LC3-II、Beclin1,凋亡相关蛋白剪切性PARP、剪切性Caspase-3及剪切性Caspase-9均高表达,该过程可被Pc TX1及ASIC1a sh RNA逆转;3-MA降低ASIC1a介导的细胞自噬,并增加ASIC1a介导的细胞凋亡,表现为LC3-II、Beclin1蛋白的下调,剪切性PARP、剪切性Caspase-3及剪切性Caspase-9蛋白的上调以及细胞凋亡率的增加;此外,预处理的Beclin1 si RNA降低了自噬蛋白LC3-II、Beclin1的表达,增加了凋亡蛋白剪切性PARP、剪切性Caspase-3及剪切性Caspase-9的表达以及上调了细胞凋亡率。结论结果显示激活的ASIC1a可在体外介导大鼠关节软骨细胞凋亡和自噬的发生,阻断或沉默自噬可以增强ASIC1a介导的细胞凋亡,因此在RA发病过程中自噬可能被作为一种新的机制参与了ASIC1a介导的关节软骨细胞凋亡。自噬的检测有助于进一步揭示早期关节损伤和RA的发病机制。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R593.22

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 刘伯龄,刘献祥;骨性关节炎关节软骨细胞凋亡的研究进展[J];福建中医学院学报;2003年04期

2 李建华,黄建荣,张雅洁,许继德,樊雪萍;胰岛素样生长因子-Ⅰ对软骨细胞凋亡的抑制[J];中国临床康复;2003年23期

3 刘晓东,杨淑霞;胚胎发育的软骨细胞凋亡[J];西南国防医药;2003年03期

4 雷鸣,郭风劲,许涛,陈安民,宋登新;超低频电磁场对硝普钠诱导的软骨细胞凋亡的影响[J];中国康复;2005年03期

5 司全明,侯筱魁,唐敏;关节内骨折后受损软骨细胞凋亡的实验研究[J];中国矫形外科杂志;2002年07期

6 王世捷;郭雄;张银刚;任峰玲;彭双清;曹峻岭;师钟丽;张增铁;;丁烯酸内酯诱导软骨细胞凋亡及其机制的研究[J];南方医科大学学报;2007年04期

7 邵世坤;裴福兴;狄东华;赵建忠;;关节软骨撞击伤后软骨细胞凋亡的实验研究[J];中国矫形外科杂志;2007年10期

8 雒焕生;李楠;王和鸣;;中药对软骨细胞凋亡影响的研究进展[J];中国中医骨伤科杂志;2010年03期

9 袁经阳;;膝关节骨性关节炎病变与细胞凋亡及相关基因表达关系[J];中医临床研究;2011年02期

10 邢涛;董林;魏国俊;雷宁波;王志勇;徐玉德;;骨刺消巴布剂对兔膝关节骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响[J];中国中医药信息杂志;2012年11期

相关会议论文 前10条

1 李建华;黄建荣;卢佳怡;樊雪萍;许继德;;胰岛素样生长因子-I对白介素-1诱导软骨细胞凋亡的抑制作用[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年

2 周小莉;李荣亨;;软骨细胞凋亡的信号转导[A];全国中西医结合强直性脊柱炎专题研讨会论文汇编[C];2007年

3 沈霖;杨艳萍;;维甲酸诱导的软骨细胞凋亡动态观察[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年

4 林木南;李西海;林叶青;刘献祥;曾金雄;刘建华;郭健红;梁永刚;涂向东;刘庆红;;动态温热疏密波对软骨细胞凋亡调控基因表达的影响[A];2012·中国医师协会中西医结合医师大会第三次会议论文集[C];2012年

5 沈霖;沈耀;杨述华;;丹参注射液对维甲酸诱导的软骨细胞凋亡的影响[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年

6 沈霖;沈耀;杨述华;;丹参注射液对维甲酸诱导的软骨细胞凋亡的影响[A];2012·中国医师协会中西医结合医师大会第三次会议论文集[C];2012年

7 刘建;樊冰;周海蓉;姜萍;周翠英;;四妙丸干预实验性兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡与增殖的实验研究[A];第十一届全国中医风湿病学术研讨会专辑[C];2006年

8 赵庆华;田纪伟;贾连顺;;重组腺病毒介导SOX-9基因对颈椎关节突软骨细胞凋亡的影响[A];泛长江流域骨科新进展暨第九届全国骨科护理研讨会论文汇编[C];2007年

9 周正新;;生脉片对IL-1介导体外培养软骨细胞凋亡的影响[A];中医药理论与应用研究——安徽中医药继承与创新博士科技论坛论文集[C];2008年

10 潘浩;胡庆丰;章煜铭;李雄峰;边红光;;补肾壮筋汤对兔早期实验性骨关节炎软骨细胞凋亡及PCNA表达的影响[A];全国中西医结合学会骨伤科专业委员会第十二次学术年会浙江省中西医结合学会骨伤科专业委员会第十次学术年会论文汇编[C];2004年

相关博士学位论文 前10条

1 袁凤来;质子感知受体OGR1介导胞内Ca~(2+)水平调控椎间盘终板软骨细胞凋亡及机制[D];复旦大学;2014年

2 赵宝祥;基于IL-1β/MAPKs通路探讨威灵仙总皂苷对骨关节炎软骨细胞凋亡的影响[D];湖北中医药大学;2016年

3 吴骞;晚期氧化蛋白产物诱导关节软骨细胞凋亡及相关机制的研究[D];南方医科大学;2015年

4 夏天;胰岛素样生长因子-Ⅰ抑制体外培养的兔软骨细胞凋亡及对细胞内游离钙影响的实验研究[D];华中科技大学;2006年

5 刘军;雌激素与骨性关节炎发病机制关系的研究[D];吉林大学;2009年

6 叶春婷;Caspase 3 siRNA抑制软骨细胞凋亡及治疗骨关节炎研究[D];暨南大学;2009年

7 金连峰;单味中药骨碎补对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡作用的实验研究[D];辽宁中医药大学;2009年

8 胡建华;骨性关节炎软骨细胞凋亡的研究[D];中国协和医科大学;1999年

9 张梅;马钱子对骨关节炎中软骨细胞凋亡与增殖的影响[D];北京中医药大学;2003年

10 张洪;细胞凋亡与骨关节炎[D];中南大学;2008年

相关硕士学位论文 前10条

1 廖邦强;GGCX对兔骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响及其对IL-1β、TNF表达的影响[D];南昌大学医学院;2015年

2 任莎莎;低强度脉冲超声波经PI3K/Akt力化学传导通路对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的作用研究[D];南京医科大学;2015年

3 李美玲;人PERK和ATF4基因siRNA腺病毒的构建及对软骨细胞凋亡的研究[D];重庆医科大学;2015年

4 冯诚;姜黄素对硝普钠诱导的兔软骨细胞凋亡的作用与机制研究[D];南京中医药大学;2016年

5 陈启鑫;黄原胶抑制骨关节炎软骨细胞凋亡及其作用机制的研究[D];锦州医科大学;2016年

6 李健;17-β雌二醇抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的作用机制研究[D];南昌大学;2016年

7 谢亚亚;自噬对酸敏感离子通道1a介导的大鼠关节软骨细胞凋亡的影响[D];安徽医科大学;2017年

8 詹碧水;压应力对体外培养软骨细胞凋亡和增殖的影响[D];苏州大学;2008年

9 王传家;一氧化氮诱导兔关节软骨细胞凋亡的实验研究[D];汕头大学;2001年

10 荣超;酸敏感离子通道在酸诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡中的作用及其线粒体途径机制研究[D];安徽医科大学;2012年

，

本文编号：1331690