腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）在多柔比星诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的作用研究

发布时间：2018-01-05 06:14

本文关键词：腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）在多柔比星诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的作用研究　出处：《江苏大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究背景和目的乳腺癌在世界范围内发病率都非常高,是危害女性健康的主要肿瘤,在发病率相对较低的我国近年来乳腺癌的发病率和死亡率也急剧增加,影响妇女及家庭的生活质量,加重家庭及国家负担。由于乳腺癌生长迅速,目前化疗是主要治疗手段之一。多柔比星(Doxorubicin,DOX)是二十世纪七十年代从波赛链霉菌变种链霉菌的发酵液中提取的一种糖苷抗肿瘤抗生素,可抑制核苷酸的合成,属于周期非特异性药物,其对多种肿瘤均有杀灭作用。DOX拥有非常好的抗肿瘤活性和独特的抗肿瘤机理,被广泛应用于乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、肉瘤和儿科肿瘤的治疗,但是由于对心肌细胞具有毒害作用使得它在临床中的使用受到很大的限制,多与其他抗肿瘤药物联用。DOX的抗肿瘤作用机制至今未完全阐明,有研究进一步明确其作用的分子机制。我们团队一直注重腺苷酸活化蛋白激酶(5'-AMP activated protein kinase,AMPK)对癌细胞的抑制能力,经过许多个实验报道,活化AMPK激活许多下游的信号通路蛋白,在药物诱导肿瘤细胞的死亡中起到非常关键的作用。本论文旨在探索腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)在多柔比星诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的作用。研究方法和材料1、使用10%胎牛血清(FBS)与抗生素的DMEM培养基培养MCF-7乳腺癌细胞,并在37℃含有5%CO2培养箱中培养,取对数生长期的癌细胞用于实验。分别用AMPK激活剂AICAR、si RNA敲低AMPK表达、AMPK抑制剂复合物C联合多柔II比星对MCF-7乳腺癌细胞进行处理,通过Western Blot方法检测不同时间点AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、P38蛋白的表达量,MTT检测细胞存活率间接反应细胞增殖,检测AMPK si RNA在多柔比星诱导的抑制癌细胞克隆形成中的作用,细胞流式实验检测AMPK si RNA在多柔比星诱导的癌细胞凋亡中的作用,检测AMPK si RNA在抑制多柔比星诱导的癌细胞ROS生成中的作用。统计学处理使用SPSS17.0统计软件对实验中的数据进行统计分析。其中对计量资料条用均数±标准差(x±s)来表示,并利用单因素方差分析(One-way ANOVA)对分组计量资料进行显著性分析,各实验组间的两两比较用单因素方差分析,同时计算p值。统计水准p0.05有统计学意义。研究结果1、多柔比星可诱导MCF-7细胞AMPK的活化,AICAR单独或联合多柔比星可诱导AMPK的激活及增加DOX对MCF-7细胞抑制率[AICAR+DOX组(17.7±1.6%)与DOX组(58.4±1.8%)的细胞存活率比较,P0.001];复合物C或si RNA敲低AMPK表达联合多柔比星后,P-AMPK及P-ACC表达明显下降,p38活化水平不受影响,MCF-7细胞增殖抑制率下降[AMPKi+DOX组(72.7±1.8%)与DOX组(48.3±1.7%)的细胞存活率比较,P0.001;AMPK si RNA+DOX组(76.9±2.2%)与错义si RNA+DOX组(96.9±1.8%)比较,P0.001]。AMPK si RNA抑制多柔比星诱导的抑制癌细胞克隆形成作用;AMPK si RNA抑制多柔比星诱导的癌细胞凋亡;AMPK si RNA抑制多柔比星诱导的癌细胞ROS生成。2、在MCF-7细胞中加入多柔比星之后,AMPKα和ACC磷酸化水平随着DOX的加入的时间延长而上升,DOX活化AMPK信号通路下游ACC及P38的活化;DOX联合AMPK激活剂AICAR处理MCF-7细胞,与单用AICAR相比,P-AMPK、P-ACC表达明显增多。我们又利用AMPKαsi RNA稳转Eca-109细胞株,沉默AMPK基因,或用AMPK抑制剂compound C抑制AMPK表达,再予以DOX药物处理后,AMPK活化程度减弱,AMPK-RNAi和AMPK抑制剂compound C能够拮抗DOX激活的AMPK的信号表达。结论在体外培养的MCF-7乳腺癌细胞中,AMPK介导DOX诱导的细胞凋亡,可能是通过活化其下游ACC及P38信号通路,另外也诱导ROS生成,激活caspase-3,最终引起癌细胞死亡。
[Abstract]:Anti - tumor effects of AMP activated protein kinase ( AMPK ) in breast cancer , lung cancer , bladder cancer , gastric cancer , ovarian cancer , Hodgkin ' s lymphoma , non - Hodgkin ' s lymphoma , multiple myeloma , sarcoma and pediatric tumors . The expression of AMPK and P - ACC in MCF - 7 cells was significantly decreased .

【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9

【参考文献】