叶黄素经由p38MAPK途径诱导人结肠癌HT29细胞抗氧化酶高表达的机制研究
本文关键词： 叶黄素 结肠癌 细胞增殖 抗氧化酶 p38 出处：《郑州大学》2017年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：目的:结肠癌是一种较为常见的消化道恶性肿瘤,目前在我国的发病率已经位于各大肿瘤发生率的第四位,消化道肿瘤发生率的第三位。其发病极其隐蔽,相当多的患者在确诊时已经是中晚期。但是,目前针对结肠癌治疗的手段十分单一,主要依靠手术切除治疗,再以放化疗药物辅助治疗。而治疗结果并不十分理想,行结肠切除术后5年患者存活率仅有50%,并伴极高的转移和复发风险。各种放化疗药物的多次使用不仅给患者的心理造成了极大的痛苦,也给机体带来了不可修复的永久性损伤。因此,寻找天然有效的植物源化合物,用于药物预防和治疗结肠癌,减小放、化疗的不良反应,辅助提高患者生存率,具有十分重要的理论和现实意义。叶黄素,一种天然植物黄体素,作为一种抗氧化的植物化合物,可以帮助机体猝灭单线态氧,清除活性氧自由基,阻止其对生物膜的侵害,延缓机体衰老,并且能够对抗氧化应激、炎症和血管生成,对包括皮肤癌、胃癌、前列腺癌、食管癌和乳腺癌等多种癌症均有抑制作用,对肿瘤的预防具有重要实用意义。本实验旨在探究叶黄素通过调节人结肠癌HT29细胞抗氧化酶的高表达抑制肿瘤发生发展的作用机制,为结肠癌的预防及治疗提供新的理论依据。方法:1.CCK-8法检测并绘制HT29细胞连续8 d生长曲线;2.不同剂量叶黄素对HT29细胞增殖抑制作用的影响。采用CCK-8法检测终浓度分别为40、80、120、160 mg·L-1的叶黄素作用于HT29细胞24、48、72 h后细胞的增殖情况;3.不同剂量叶黄素对HT29细胞周期的影响。流式细胞仪检测终浓度分别为40、80、160 mg·L-1的叶黄素作用于HT29细胞48 h后细胞周期的变化情况;4.不同剂量叶黄素对HT29细胞中HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表达水平的影响。终浓度分别为40、80、120、160 mg·L-1的叶黄素作用于HT29细胞48 h后,分别采用RT-q PCR技术和Western blot技术检测细胞中HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表达水平的变化情况;5.抑制p38MAPK通路探究叶黄素对HT29细胞中Nrf2/ARE通路下游HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表达水平的变化。p38MAPK抑制剂SB203580作用于HT29细胞1 h,加入叶黄素48 h后,分别采用RT-q PCR技术和Western blot技术检测细胞中HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表达水平的变化情况。结果:1.CCK-8法检测结果表明:叶黄素显著抑制HT29细胞的增殖,并存在时间-效应和剂量-效应关系(P0.01)。2.流式细胞仪检测结果表明:不同剂量叶黄素处理HT29细胞48 h后,HT29细胞周期受到明显阻滞,处于G0/G1期的细胞数量显著增加,S期比例显著下调,表明叶黄素可以将细胞生长阻断在G0/G1期。3.RT-q PCR技术和Western blot技术检测结果显示:不同剂量叶黄素处理HT29细胞48 h后,细胞中抗氧化酶HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表达水平与阴性对照组相比显著上调,且具有剂量-效应关系(P0.05),说明叶黄素可以同时在m RNA转录水平和蛋白表达水平上调HO-1、NQO1、SOD2基因的表达。4.RT-q PCR技术和Western blot技术检测结果显示:叶黄素联合p38MAPK抑制剂SB203580作用HT29细胞48 h后,SB203580加叶黄素组HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表达水平较单独叶黄素组明显下调(P0.05),表明抑制剂SB203580显著抑制叶黄素对细胞中HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表达水平的上调作用。结论:叶黄素对HT29细胞的增殖具有明显抑制作用,其机制可能是通过阻滞HT29细胞周期,并作用于p38MAPK通路,在基因转录水平和蛋白表达水平介导Nrf2/ARE通路并激活其下游抗氧化酶HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白的高表达,介以对抗肿瘤细胞内的氧化应激状态,抑制肿瘤的发生发展。
[Abstract]:Objective : To study the effect of xanthophylls on the proliferation of HT29 cells and to provide a new theoretical basis for the prevention and treatment of colon cancer . The expression level of HO - 1 , NQO1 , SOD2 mRNA and protein in HT29 cells was significantly lower than that of negative control group ( P0.01 ) . The mechanism may be by blocking the cell cycle of HT29 and acting on the p38MAPK pathway , mediating the expression of Nrf2 / AR at the level of gene transcription and protein expression , and activating the high expression of the downstream antioxidant enzymes HO - 1 , NQO1 , SOD2 m RNA and protein to counter the oxidative stress state in tumor cells and inhibit the development of tumor .
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R96
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，本文编号：1479251
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