基于LC-HR-MS~n的糖痹康颗粒成分分析及芍药内酯苷对高糖诱导雪旺细胞氧化应激损伤保护作用研究

发布时间：2018-04-18 04:27

本文选题：成分分析 + 含量测定　；参考：《北京中医药大学》2017年硕士论文

【摘要】：中药复方药效物质基础研究理论,尚且没有明确的定义,但是随着现代分析技术以及相应理论的快速稳定发展,很多研究者在不同层次和不同角度,不断对其提出新的研究思路和假说。随着中药现代化不断推进,中药复方药效物质基础更是研究热点,发挥着重要的基础研究作用,已是阐明中药药效药理作用及其机制和临床疗效的先决条件。为更深层次开发研究中药提供重要支持,是中药现代化不可缺少的重要组成部分。首先,中药复方药效物质基础研究的前提条件是中药复方质量控制,中药指纹图谱和含量测定对中药复方可进行综合评价,全面控制。其次,研究中药复方药效物质基础最本质的研究是对其化学成分的确认,这样可更清晰的阐述中药复方药效物质基础。同时,以传统的药物化学为基础,利用现代先进分析测试技术,研究药物进入血清中的原型成分和经生物转化的代谢产物也作为中药复方物质基础研究的重要内容,对候选药物筛选,创新中药和中药现代化具有重大意义。但是,中药复方所含化学成分数量大,结构类型繁多,含量大小比一,甚至可以达到痕量级别,也为检测制造巨大麻烦,而且,传统研究方法时间长、效率低,如此多的现实问题已成为中药复方物质基础研究的重中之重。因此,如何快速、高效地阐明中药复方化学成分,找到新方法、新技术,突破中药复方物质基础研究的瓶颈,已成为国内外学者研究热点问题。糖痹康颗粒(专利申请号:200810167551.1)主要由黄芪、女贞子、桂枝、赤芍、黄芩、黄连、水蛭、延胡索、鸡血藤组成,益气养阴、解毒化瘀通络功效,治疗糖尿病周围神经病变具有良好的临床效果。因该药未上市,且该制剂的化学成分尚不明确,为了初步探索糖痹康颗粒的药效物质基础,本课题利用HPLC-DAD高效液相仪、UPLC-LTQ-Orbitrap高分辨液质联用仪,建立了糖痹康颗粒的质量控制方法以及化学成分快速鉴定方法,并通过建立细胞模型对糖痹康颗粒中主要成分芍药内酯苷进行体外活性作用研究。主要研究内容与结果如下:1糖痹康颗粒质量控制研究为了科学评价并有效控制糖痹康颗粒剂的质量,确保其制备方法稳定可行,本实验通过HPLC高效液相色谱技术,建立了糖痹康颗粒HPLC指纹图谱以及多成分定量研究方法。结果表明,本实验通过对10批糖痹康颗粒进行HPLC指纹图谱构建,并分析了糖痹康颗粒的HPLC指纹图谱与原药材HPLC图谱的相关性,对25个峰进行可能归属,明确18个峰。通过对精密度、稳定性、重复性方法学考察,可知糖痹康颗粒中25个共有峰的相对保留时间和相对保留峰面积的RSD3%,表明所建立的指纹图谱测定方法符合中药指纹图谱建立的技术要求,可为糖痹康颗粒的制备方法及质量控制提供参考。本实验也通过HPLC-DAD高效液相色谱法,建立了同时测定糖痹康颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量的方法,可为多指标成分测定质量控制提供参考。2糖痹康成分分析研究为了更多检测出糖痹康颗粒所含化学成分,实现化合物的高通量筛选,本实验利用UPLC-LTQ-Orbitrap的液质联用分析方法,采用全扫描-动态排除(Full scan-Dynamic exclusion,FS-DE)和数据依赖性扫描(data dependent scan,DDS),对糖痹康颗粒进行数据采集和化学成分分析。通过利用化合物精确分子量预测分子式,结合比对各类化合物对照品的质谱裂解规律,massbank、chemspider、human metlin等数据库质谱裂解信息,相关参考文献报道,本实验在糖痹康颗粒中快速鉴定化合物51个。黄酮类化合物12个,黄酮苷类化合物8个,生物碱类化合物12个,芍药苷类化合物6个,苯乙醇苷类化合物2个,酚酸类化合物2个,其他类化合物9个,并对每一种化学成分进行药材来源归属,比较全面反映糖痹康颗粒中化学成分信息。本实验通过以上相同方法检测SD大鼠血清,鉴定体内入血成分15个,生物碱类7个,黄酮及其苷类4个,苯乙醇苷类1个,酚酸类1个,代谢产物2个。通过对糖痹康颗粒体外体内化学成分的检测鉴定,为其物质基础研究提供结果和方法参考,为糖痹康颗粒药效作用及机制研究奠定基础。3芍药内酯苷对大鼠坐骨神经雪旺细胞的保护作用研究本实验通过不同浓度的葡萄糖对大鼠坐骨神经雪旺细胞的影响,建立了以150mmol/LD-葡萄糖,培养时间为48h的细胞氧化应激模型,通过设立芍药内酯苷高中低组(100μM、20μM、4μM),模型组,阳性药组(100μM),正常组,利用流式细胞仪定量检测细胞内ROS含量和荧光显微镜定性观察细胞内ROS状态以及CCK-8检测细胞活性,发现芍药内酯苷可以增加雪旺细胞增殖并改善氧化应激状态,具有保护大鼠坐骨神经雪旺细胞的作用。
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【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R286.0;R285

【参考文献】