刺糖多糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节及信号通路的研究

发布时间：2018-06-16 14:20

  本文选题：刺糖多糖 + 巨噬细胞RAW264.7　； 参考：《新疆医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:1.研究刺糖中分离纯化而来的刺糖多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖作用,吞噬功能,NO释放量的影响。2.考察刺糖多糖干预巨噬细胞RAW264.7后细胞因子的调节对免疫活性的影响。3.探讨刺糖多糖对巨噬细胞RAW264.7参与信号通路基因的mRNA调控的影响。4.考察刺糖多糖对巨噬细胞RAW264.7参与信号通路基因的蛋白水平的调控。方法:1.经刺糖多糖干预的巨噬细胞RAW264.7,采用MTT法和CCK-8法考察其增殖活性、采用中性红实验考察吞噬功能,利用Griess试剂盒检测NO的生成水平。2.用ELISA试剂盒测定经刺糖多糖干预后,巨噬细胞RAW264.7的细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6和IL-12的调节水平。3.采用实时荧光定量PCR法检测刺糖多糖对巨噬细胞RAW264.7中的p38、NF-κBp65、ERK1/2、JNK1/2/3基因mRNA表达调控的影响。4.通过蛋白印迹法Western blot考察刺糖多糖在信号转导通路中基因p38、NF-κBp65、ERK1/2、JNK1/2/3蛋白质表达量的影响,及其参与免疫应答机制的原理探究。结果:1.根据MTT和CCK-8法测定刺糖多糖对巨噬细胞RAW264.7的增殖活性,作用24h和48h后,与空白对照组相比,高浓度的刺糖多糖可明显促进巨噬细胞RAW264.7的增殖(P0.05)。2.利用CCK-8法检测,高浓度组刺糖多糖能够促进巨噬细胞RAW264.7分泌细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-12,还可以增强巨噬细胞RAW264.7的吞噬功能和NO的生成水平。3.实时荧光定量PCR法测定结果表明,不同浓度刺糖多糖干预巨噬细胞RAW264.7 24h后,诱导p38、NF-κBp65、ERK1基因mRNA表达水平呈明显上调(P0.05)。4.蛋白印迹法Western blot实验结果显示不同浓度刺糖多糖干预巨噬细胞RAW264.7 24h后,基因p38、NF-κBp65、ERK1/2的蛋白磷酸化水平明显上调(P0.05)。结论:1.刺糖多糖能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖以及对其免疫活性有良好的影响。2.刺糖多糖对巨噬细胞RAW264d.7的细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-12的分泌有促进作用。3.通过对基因表达调控的考察,其免疫机制与NF-κBp65,p38和ERK1的mRNA表达水平上调有关。4.Western blot结果显示,刺糖多糖上调p38、NF-κBp65、ERK1/2蛋白的磷酸化水平,从而激活MAPK信号通路和NF-κB信号通路。
[Abstract]:AIM : To investigate the effect of the polysaccharide on the expression of RAW264.7 in macrophages and to investigate the effect of the polysaccharide on the expression of RAW264.7 . The results showed that : 1 . The effect of the polysaccharide on the expression of RAW264.7 in macrophages was investigated by MTT and CCK - 8 .
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】

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本文编号：2026987