【摘要】：藤梨根为猕猴桃属植物中华猕猴桃(Actindia chinensis Planch)的干燥根,其味苦,性寒,具有清热利湿、解毒消肿、散瘀通络等作用。临床上主要用于肝炎、湿热黄疸、痢疾、风湿性关节炎、消化道肿瘤等。本课题对藤梨根进行了系统的化学成分研究,并对所获得的三萜类成分进行了抗肿瘤活性研究。采用硅胶柱色谱、C18反相柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及HPLC等方法,从藤梨根乙醇浸提物的乙酸乙酯部位共分离并鉴定了 18个化合物,其结构分别为:ursolic acid(1);2α,3α,24-trihydroxyolean-12-en-28-oic acid(2);corosolic acid(3);cleomiscosin A(4);isolariciresinal(5);7,8-trans-3,5'-dimethoxy-4',7-epoxy-8,3'-neolignane-5,9,9'-triol(6);7R,8R-threo-4,7,9,9'-tetrahydroxy-3,3'-dimethoxy-8-O-4'-neolignan(7);7S,,8S,-threo-4,7,9,9'-tetrahydroxy-3,3'-dimethoxy-8-0-4'-neolignan(8);quercetin(9);3,5,7,3',5'-pentahydroxyflavan(10);fraxetin(11);scopoletin(12);β-sitosterol(13);daucosterol(14);vanillic acid(15);methyl caffeate(16);2,6-dihydroxy-1,4-benzenedicarboxy lic acid dimethyl ester(17);2,3-dihydroxypropyl stearate(18)。其中,化合物 4,5,6,7,8,10,11,12,16,17,18为首次从该植物中分离得到。三萜类为藤梨根中主要的抗癌活性成分。采用MTT法对所获得三萜类成分1,2和3进行抗肺癌细胞增殖活性筛选。结果表明,化合物2和3对肺癌NCI-H292细胞有增殖抑制作用,其IC50值分别为29.28 μ和12.20 μM;同时,化合物3对肺癌A549细胞也有一定的增殖抑制作用,其IC50值为33.83 μM。我们选取藤梨根中含量较大,对肺癌NCI-H292细胞有一定增殖抑制作用,对人脐静脉内皮EA.hy926细胞无毒性作用的化合物2(TLG-2)做进一步研究。MTT实验和细胞实时生长检测(RTCA)实验表明TLG-2能够剂量依赖性和时间依赖性的抑制肺癌NCI-H292细胞增殖;PI单染实验结果表明TLG-2并不能引起肺癌细胞周期的改变;DAPI染色实验和Annexin V/PI双染实验结果表明TLG-2能够诱导肺癌NCI-H292细胞凋亡。进一步的研究发现,TLG-2能够诱导细胞内ROS累积、线粒体膜电势(MMP)降低。Western blot结果表明TLG-2能诱导促凋亡蛋白Bax表达增加,抑凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL表达减少,细胞色素c(Cytochromec)释放,进一步激活caspase级联反应,导致细胞凋亡。Western blot结果和免疫荧光结果显示,TLG-2能促使凋亡诱导因子AIF入核,使核内的DNA断裂,引发凋亡。综上所述,TLG-2能够通过线粒体途径诱导细胞凋亡。去氢鸦胆苦醇B(DHB)是从鸦胆子中分离得到的苦木素类化合物,前期的研究表明DHB能够诱导肺癌A549和NCI-H292细胞凋亡。本课题主要研究DHB在低浓度下能够促进顺铂(CDDP)诱导的肺癌A549细胞凋亡。RTCA结果表明,DHB能够增强CDDP诱导的细胞增殖抑制作用;DAPI染色及Annexin V/PI双染的结果表明DHB能够促进CDDP诱导的细胞凋亡;DHB与CDDP联用,能够导致细胞MMP降低,细胞色素c释放以及AIF入核;进一步研究表明,DHB与CDDP联用能使凋亡相关蛋白的表达发生改变,如:促凋亡蛋白Bax表达增加,抑凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL表达减少;同时还能使活化的caspase-9、caspase-3以及PARP蛋白表达增加。这说明DHB能够通过线粒体介导的凋亡途径增强CDDP诱导的细胞凋亡。肿瘤细胞中的Nrf2高表达能够导致肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。我们检测到DHB能够时间依赖性和剂量依赖性的降低A549细胞内Nrf2的表达,同时也能剂量依赖性的降低Nrf2下游蛋白的表达。RT-PCR结果显示,DHB能剂量依赖性的抑制Nrf2及其下游基因的表达,这可能使得细胞内的ROS累积,最终导致ROS诱导的线粒体凋亡。这些结果表明,DHB与CDDP联合使用具有协同抗肺癌的作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284;R285
【参考文献】
相关期刊论文 前10条
1 柏玉冰;李春;周亚敏;皮胜玲;夏伯候;李亚梅;林丽美;廖端芳;;夏枯草的化学成分及其三萜成分的抗肿瘤活性研究[J];中草药;2015年24期
2 蔡鲁;李彬;肖艳华;董俊兴;;醉鱼草茎叶的化学成分研究[J];国际药学研究杂志;2015年05期
3 赫军;李栋;马秉智;魏凤玲;赵铁;;藤梨根化学成分和抗肿瘤药理作用研究进展[J];中国实验方剂学杂志;2015年04期
4 卢静;杨丰庆;夏之宁;;尖嘴林檎叶的化学成分[J];中成药;2014年08期
5 彭德乾;高娟;郭秀梅;王金兰;张树军;;蒙古蒲公英根化学成分研究[J];中成药;2014年07期
6 刘天行;王伟;郭佳;辛志宏;;米糠脂溶性单体化合物的分离与结构鉴定[J];食品科学;2014年09期
7 张旗;苏ml;汤明杰;叶永山;王鹏龙;蔡程科;李健;雷海民;王英新;李强;;双黄连粉针剂的化学成分研究[J];中医药学报;2014年01期
8 龙凯花;王小平;白吉庆;李晔;史洋;;中药藤梨根抗肿瘤研究[J];中国现代中药;2013年10期
9 胡兵;沈克平;史秀峰;邓珊;魏蒙蒙;;藤梨根对RKO结肠癌细胞失巢凋亡的作用[J];中国实验方剂学杂志;2013年16期
10 陈辉;柏健;方振峰;马双刚;庾石山;陈晓光;;柔毛鸦胆子茎的化学成分及其肿瘤细胞毒活性研究[J];中国中药杂志;2013年14期
相关会议论文 前1条
1 周雪峰;张鹏;皮慧芳;张勇慧;阮汉利;吴继洲;;中华猕猴桃根中三萜类化学成分研究(英文)[A];第七届全国天然有机化学学术研讨会论文集[C];2008年
相关博士学位论文 前3条
1 单建贞;藤梨根有效成分对结肠癌细胞增殖抑制作用及相关机制的研究[D];浙江大学;2010年
2 徐一新;中药藤梨根和猫人参活性成分研究[D];第二军医大学;2010年
3 周雪峰;冷水七、中华猕猴桃根的物质基础研究[D];华中科技大学;2008年
相关硕士学位论文 前2条
1 陈晓晓;中华猕猴桃根化学成分研究[D];济南大学;2011年
2 杨帆;藤梨根中化学成分的研究[D];西南交通大学;2007年
，
本文编号：
2448026
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/2448026.html
