痰热清注射液对产KPC酶肺炎克雷伯菌耐药抑制作用的实验研究

发布时间：2020-03-16 20:04

【摘要】：肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)性质是革兰阴性杆菌,由Friedlander在1882年从一位大叶性肺炎病人的痰液中分离纯化得到。肺炎克雷伯杆菌外周有荚膜,这个特点导致其对外界环境的适应性增强。肺炎克雷伯杆菌常寄生在人体的肠道和呼吸道等部位,是临床引起感染性疾病最为常见的病原体之一,是非常重要的条件性致病菌。肺炎克雷伯杆菌感染后可造成败血症,重症肺炎,尿路,呼吸系统以及颅内,皮肤软组织等部位的感染,且发生率不断提高。近年来肺炎克雷伯杆菌不断引发致命性社区获得性问题,这引起了医学界广泛的关注。在健康人群中,肺炎克雷伯杆菌引起的感染性疾病发病率不断的上升,其中包括肺炎、脑膜炎、眼内炎以及肺炎克雷伯杆菌性肝脓肿等相关疾病。许多研究均表明了,肺炎克雷伯菌标本主要来自于痰液,提示肺炎克雷杆菌疾病主要引起呼吸系统疾病。根据2005-2014年CHINET克雷伯菌属细菌耐药性监测显示:10年之内克雷伯杆菌的临床检出率不断上升,从2005年的10.1%上升至2014年的14.3%,最主要的标本来源为呼吸道,占比为60.0%。2005-2014年的监测显示肺炎克雷伯杆菌对碳青霉烯类药物的耐药性呈上升趋势,美罗培南耐药率从2005年2.8%上升至2014年13.4%。肺炎克雷伯杆菌存在着不同的致病因子,这些因素的共同作用造成了人体各器官和系统的损伤。肺炎克雷伯杆菌的致病因子主要有荚膜、菌毛、内毒素、铁细胞和铁载体、血清杀菌素、抗菌肽、外膜孔道蛋白等。痰热清由五味中药组成,分别是:黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花、连翘组成。痰热清主要临床功效为解毒、清热、化痰。临床上主要用于风温肺热病属痰热阻肺症。临床常见症状有:咳嗽、发热、咯痰不爽、口渴、舌红、苔黄等;主要用于急性支气管炎,急性肺炎(早期)出现的上述症状,临床用途非常广泛。痰热清具有化痰、抑菌、抗病毒、解热以及免疫调节等方面的药理作用。将其转换为注射剂型后,痰热清在临床上的应用变得越来越广泛。痰热清在临床上还有很多没有被发掘的使用价值,值得我们进一步进行挖掘,给临床工作带来等多的便利。目的:通过痰热清注射液在体外对产KPC酶肺炎克雷伯菌株抑菌作用的观察,研究痰热清注射液对产KPC酶肺炎克雷伯菌株的作用效果,探讨中药以及中西药联合应用对产KPC酶肺炎克雷伯菌株的抑制作用,临床中进行中药对产KPC酶肺炎克雷伯菌株耐药的干预,以达到减少和延缓细菌耐药,并为进一步研究中药在体内的抑菌机理打下基础。方法:采用全自动微生物鉴定及药敏分析系统(Phenix-100)进行细菌的鉴定和表型筛选;按照临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standard Institute,CLSI)推荐的纸片扩散法对初筛可疑的耐药菌株进行确证实验,按照CLSI推荐的肉汤稀释法研究痰热清注射液、痰热清联合美洛西林、痰热清联合美洛西林舒巴坦以及痰热清联合亚胺培南西司他丁钠对产KPC酶的肺炎克雷伯菌的体外抑制作用。结果:痰热清注射液对产KPC酶的肺炎克雷伯菌的药物最低抑菌浓度MIC为500 μl/ml;美洛西林对产KPC酶的肺炎克雷伯菌的药物最低抑菌浓度MIC为4096 μg/ml;美洛西林舒巴坦钠对产KPC酶的肺炎克雷伯菌药物最低抑菌浓度MIC为1024 μ g/ml;亚胺培南西司他丁钠对产KPC酶的肺炎克雷伯菌药物最低抑菌浓度MIC为64 μ g/ml。当痰热清和美洛西林同时作用于产KPC酶的肺炎克雷伯菌时,高浓度的痰热清溶液可以使美洛西林的MIC值提高,提示临床上美洛西林不能与痰热清注射液短时间内同时使用。如果痰热清与美洛西林联合应用不仅对降低美洛西林的MIC值没有帮助甚至还会产生副作用。当痰热清的浓度为350 μ l/ml-500 μ l/ml时,可使美洛西林的MIC值上升2倍至8192 μ g/ml。当痰热清和美洛西林舒巴坦钠同时作用于产KPC酶的肺炎克雷伯菌时,痰热清溶液和美洛西林舒巴坦联合应用对降低美洛西林舒巴坦的MIC值没有帮助,提示临床上美洛西林舒巴坦钠不宜与痰热清注射液同时使用。两者短时间内联合应用没有协同作用。当痰热清和亚胺培南西司他丁钠同时作用于产KPC酶的肺炎克雷伯菌时,当痰热清溶液浓度为250-300 μl/ml时,可以使亚胺培南西司他丁钠MIC值下降2倍,达到32μ g/ml时即可抑制产KPC酶肺炎克雷伯杆菌的生长繁殖;当痰热清溶液浓度为350-500μ l/ml时,可以使亚胺培南西司他丁钠MIC值下降4倍,达到16 μ g/ml即可抑制产KPC酶肺炎克雷伯杆菌的生长繁殖。结论:产KPC酶的肺炎克雷伯杆菌毒性较强,不同抗生素对其的MIC值均较大,比其他常见耐药菌的MIC值要高。酶抑制剂对产KPC酶的肺炎克雷伯杆菌的生长繁殖有一定的抑制作用,故美洛西林舒巴坦的MIC值较美洛西林低。痰热清注射液单独应用时对产KPC酶的肺炎克雷伯杆菌有良好的抑制作用,临床上可以推广使用;由于不同种类抗生素化学结构和抑菌机理之间的差别,痰热清与不同抗生素之间的联合应用效果不尽相同。痰热清与亚胺培南西司他丁钠之间的联合应用效果较为理想,高浓度的痰热清溶液可以使亚胺培南西司他丁钠的MIC值出现较为明显的下降趋势,最高可以使亚胺培南西司他丁钠的MIC值下降4倍,稍低浓度的痰热清溶液可以使亚胺培南西司他丁钠的MIC值下降2倍,临床上推广应用的价值较大;然而,痰热清注射液与美洛西林联合应用效果不佳,两者甚至会产生一定拮抗作用,高浓度的痰热清溶液甚至会使美洛西林对产KPC酶的肺炎克雷伯杆菌的MIC值升高2倍;痰热清溶液和美洛西林舒巴坦同时应用时没有降低并美洛西林舒巴坦的用药量,美洛西林舒巴坦的MIC值保持不变,临床上两药不宜联合应用。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】