文蛤多糖的提取纯化、结构分析及抗氧化、免疫活性初步研究

发布时间：2017-03-30 07:20

  本文关键词：文蛤多糖的提取纯化、结构分析及抗氧化、免疫活性初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：文蛤(Meretrix meretrix Linnaeus.)主产于我国东部沿海,资源丰富,具有较高的营养价值和药用价值。自古以来文蛤即为药食同源的动物之 ,传统医学证明文蛤浸提物具有治疗发炎、湿热、疮、保肝和防癌的功效。近代研究表明,文蛤所含有的蛋白、多糖、脂肪酸等是其生理、药理活性的物质基础。多糖类物质是文蛤中的一类主要活性物质,其在抗氧化、提高免疫及抗肿瘤等方面均具有良好的生物活性。尽管如此,目前对于文蛤多糖的研究仍不够系统和深入,关于文蛤多糖的结构以及活性等方面的信息仍然匮乏。为了进一步了解文蛤中多糖成分的理化性质和生物活性,本课题对文蛤多糖进行了提取、分离和结构分析,并初步开展了抗氧化及免疫调节活性研究。本课题依次采用酶法提取、乙醇沉淀、Sevage法除蛋白、乙醇再沉淀的方法提取获得了文蛤多糖,提取得率(以文蛤干重计)为6.0-10.0%。以文蛤多糖得率为指标,选取加酶量、加酶种类、提取时间和料水比四个因素进行多糖提取的单因素条件优化。优化后的提取工艺为：胰蛋白酶用量2.0%(以底物计),料水比1：10,提取时间4 h。采用Sevage法脱蛋白得到蛋白含量小于5.0%的文蛤粗多糖,进一步用DEAE-52纤维素层析柱和Superdex-200凝胶层析柱进行分离纯化后得到两个多糖组分MMPX-1和MMPX-2。经Superdex 200凝胶色谱柱法对MMPX-1和MMPX-2进行纯度鉴定,证明二者都是均一的多糖组分。进一步采用紫外光谱(UV)、红外光谱(IR)、核磁共振(NMR)、气相色谱(GC)和高碘酸氧化、Simth降解、甲基化反应等方法对上述两个文蛤多糖组分进行结构表征及鉴定。分析结果表明：MMPX-1的平均分子量为1.04×106Da,其单糖组成包括甘露糖、葡萄糖和半乳糖,相应的摩尔百分比为21.1%,29.9%,49.0%；主链为(1→4)-β-半乳糖,(1→4)-β-葡萄糖,(1→4)-β-甘露糖,支链为连接在主链半乳糖糖基C-6位置上的(1→3)-α-葡萄糖和α构型末端葡萄糖。MMPX-2的平均分子量为5.0×105Da,主要由葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔百分比分别为87.7%和12.3%,主链为(1→4)-α-葡萄糖,支链为连接在主链葡萄糖C-6位置上的(1→3)-β-半乳糖和β构型末端半乳糖。进一步对纯化得到的两个多糖组分进行体外抗氧化及细胞免疫活性的评价。以抗坏血酸为阳性对照,对文蛤多糖MMPX-1和MMPX-2进行体外清除DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基的能力以及总还原能力的表征等实验。实验结果表明,两个多糖组分均具有一定的抗氧化活性,MMPX-2的抗氧化活性略高于MMPX-1。以脂多糖LPS为阳性对照,对文蛤多糖MMPX-1和MMPX-2诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7产生细胞因子(NO、TNF-α、IL-6、IL-1β)的能力进行评价,结果表明,MMPX-2具有良好的激活小鼠巨噬细胞产生细胞因子的作用,其免疫活性值得进一步研究。
【关键词】：文蛤 多糖 结构鉴定 抗氧化 免疫调节
【学位授予单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R284
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 绪论7-13
• 1.1 文献综述7-11
• 1.1.1 文蛤研究概况7-8
• 1.1.2 贝源多糖的研究现状8-11
• 1.2 本课题的目的意义及主要内容11-13
• 1.2.1 研究目的和意义11-12
• 1.2.2 主要研究内容12-13
• 第二章 文蛤多糖提取条件优化及分离纯化13-22
• 2.1 引言13
• 2.2 材料与方法13-16
• 2.2.1 实验材料13
• 2.2.2 主要仪器设备与试剂13-14
• 2.2.3 实验方法14-16
• 2.3 结果与分析16-21
• 2.3.1 葡萄糖标准曲线的绘制16
• 2.3.2 提取工艺的优化结果16-18
• 2.3.3 Sevage法脱除蛋白18-19
• 2.3.4 DEAE-52纤维素柱初步分离纯化19
• 2.3.5 Superdex 200进一步分离纯化19-20
• 2.3.6 文蛤多糖纯度鉴定结果20-21
• 2.4 本章小结21-22
• 第三章 文蛤多糖MMPX-1与MMPX-2的结构鉴定22-35
• 3.1 引言22
• 3.2 材料与方法22-25
• 3.2.1 实验试剂22-23
• 3.2.2 仪器与设备23
• 3.2.3 实验方法23-25
• 3.3 结果与分析25-34
• 3.3.1 文蛤多糖分子量的测定结果25
• 3.3.2 文蛤多糖的单糖组成分析25-26
• 3.3.3 文蛤多糖的红外光谱分析26-28
• 3.3.4 文蛤多糖的高碘酸氧化,Smith降解及GC分析28-31
• 3.3.5 文蛤多糖的甲基化反应及GC-MS分析31-33
• 3.3.6 文蛤多糖的核磁共振波谱分析33-34
• 3.4 本章小结34-35
• 第四章 文蛤多糖的体外抗氧化和免疫活性的初步研究35-46
• 4.1 引言35
• 4.2 材料与方法35-40
• 4.2.1 实验材料与试剂35-36
• 4.2.2 仪器与设备36
• 4.2.3 实验方法36-40
• 4.3 结果与分析40-44
• 4.3.1 文蛤多糖体外抗氧化结果40-43
• 4.3.2 文蛤多糖增强细胞免疫结果43-44
• 4.4 本章小结44-46
• 主要结论与展望46-47
• 主要结论46
• 存在问题46
• 展望46-47
• 致谢47-48
• 参考文献48-52
• 附录1：作者在攻读硕士学位期间发表的论文52-53
• 附录2：论文主要图谱53-55

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本文编号：276546