补肾固表颗粒对免疫低下小鼠的影响及安全性评价

发布时间：2020-11-02 04:55

　　 目的补肾固表颗粒是徐氏儿科治疗反复呼吸道感染的经典方,反复呼吸道感染的主要病因为免疫功能低下及紊乱,本实验通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫低下小鼠模型,以补肾固表颗粒灌胃给药4周,以玉屏风颗粒为对照组,研究补肾固表颗粒对免疫低下小鼠免疫功能的调节作用,并通过最大给药量对补肾固表颗粒进行安全性评价。为补肾固表颗粒防治反复呼吸道感染及临床用药的安全性提供理论和实验依据。方法实验一:将60只清洁级雄性ICR小鼠随机分成6组,即空白对照组,模型组,玉屏风颗粒组,补肾固表颗粒低剂量组、补肾固表颗粒中剂量组、补肾固表颗粒高剂量组,每组10只。除空白组外,其他各组给予环磷酰胺腹腔注射,按50mg/kg/d,连续3d,建立免疫低下小鼠模型。造模成功后,各组给予相应药物灌胃,补肾固表颗粒低、中、高剂量组分别按4.5g/kg/d、9g/kg/d和18g/kg/d灌胃给药;阳性对照药玉屏风颗粒按2.25g/kg/d给药,模型组及空白对照组给予生理盐水,灌胃体积均为0.5mL/次,每日2次,连续4周。最后一次给药后,撤除饲料,自由饮水。次日小鼠麻醉后,摘除眼球取血,室温静置2h后放入离心机中离心,转速2500r/min,离心15分钟,吸取上清液分装于0.3mL的离心管中,-80℃冰箱保存备用,冻存的血清将用来检测TNF-α、IL-2及IFN-γ水平等免疫指标。解剖小鼠,摘取小鼠脾脏用电子天平称重,计算实验后各组小鼠脾脏系数,随后提取小鼠脾淋巴细胞,检测脾淋巴细胞增殖能力、NK细胞杀伤活性。实验二:选取清洁级ICR小鼠40只,体重18~22g,雌雄各半,按体重随机分为2组,即空白组、给药组,每组20只。给药组以补肾固表颗粒最大浓度(1mL含1.71g生药)和最大灌胃体积(0.4ml/10g),一日2次,间隔6小时灌胃,对照组给予等体积等次数的生理盐水灌胃。连续观察14天,观察并记录动物异常现象(精神状态、活动、皮毛情况、粪便等分泌物)、体重变化和死亡情况等,对观察期间死亡小鼠及时进行解剖观察,其余小鼠在观察期结束后进行解剖观察,有异常变化时做病理组织检测。结果1.小鼠体重变化:与空白对照组比较,环磷酰胺模型小鼠体重减轻,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,灌胃给药后,玉屏风颗粒组、补肾固表颗粒各剂量组小鼠体重均增加(P0.05),差异具有统计学意义;补肾固表颗粒低、中、高剂量组之间比较,差异无统计学意义(P0.05)。2.脾脏系数:与空白对照组比较,环磷酰胺模型小鼠脾脏系数减低;与模型组比较,灌胃给药后,玉屏风颗粒组、补肾固表颗粒各剂量组小鼠脾脏系数均增加(P0.05),差异具有统计学意义;补肾固表颗粒低、中、高剂量组之间的量效关系比较,差异不具有统计学意义(P0.05)。3.小鼠脾淋巴细胞增殖能力:与空白对照组比较,环磷酰胺模型组小鼠脾淋巴细胞增殖能力显著下降(P0.01)。与模型组小鼠相比,灌胃给药后补肾固表颗粒各剂量组及玉屏风颗粒组脾淋巴细胞的增殖能力提高,并接近正常水平,差异具有统计学意义(P0.05)。4.小鼠NK细胞杀伤活性:与空白对照组比较,模型组小鼠NK细胞杀伤活性降低,其差异具有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,灌胃给药后补肾固表颗粒各剂量组及玉屏风颗粒组NK细胞杀伤活性增高,差异均有统计学意义(P0.05)。补肾固表颗粒高剂量组杀伤活性强于低剂量组和玉屏风颗粒组,差异具有统计学意义(P0.05)。5.血清IL-2、IFN-γ及TNF-α水平变化:与空白对照组比较,模型组小鼠血清IL-2、IFN-γ水平降低,TNF-α水平升高,差异均有统计学意义(P0.05),给药后,补肾固表颗粒各剂量组及玉屏风颗粒组血清IL-2、IFN-γ水平升高,TNF-α水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。补肾固表颗粒中、高剂量组升高IL-2水平优于玉屏风颗粒组(P0.05)。补肾固表颗粒中、高剂量组升高IFN-γ水平优于低剂量组(P0.05)补肾固表颗粒各剂量组间TNF-α水平量效关系比较,差异无统计学意义(P0.05)。6.急性毒性实验组小鼠给药数分钟后,小鼠活动稍减,4小时后恢复正常。给药第2天小鼠食量明显下降,随后即增长,无其他异常表现。观察期间小鼠体重总体呈增长趋势。通过统计学分析,提示差异无统计学意义(P0.05)。观察期内,小鼠毛色光亮,无兴奋、躁动、竖毛、凸眼、扭体等反应;摄食、饮水、大小便等均无明显异常。无小鼠死亡。观察14天后,对小鼠进行解剖,肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、胃、肠道等脏器,均未见出血、充血、水肿等明显的病理变化。结论1.采用腹腔注射环磷酰胺能够建立免疫低下小鼠模型,造模后小鼠饮食减少,扎堆明显,体重下降,脾脏系数减低,脾淋巴细胞增殖能力、NK细胞杀伤活性减低,说明环磷酰胺造模成功。2.补肾固表颗粒能明显增强免疫低下小鼠脾淋巴细胞增殖能力、NK细胞杀伤活性,提高机体细胞免疫能力。3.补肾固表颗粒可以提高免疫低下小鼠血清IL-2和IFN-γ水平,降低TNF-α水平,通过调节细胞因子水平,从而调节细胞免疫和体液免疫功能,增强机体的免疫力。4.补肾固表颗粒常用剂量口服给药安全。
【学位单位】：山西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

补肾固表颗粒对免疫低下小鼠的影响及安全性评价7表2各组小鼠体重比较()组别n体重造模前造模后给药后空白对照组1023.0±1.4124.50±3.8931.60±0.97模型组1023.6±1.8422.20±3.2927.20±2.70玉屏风组1023.4±1.6522.60±3.2731.10±0.99▲低剂量组1023.2±1.4022.40±2.1532.20±2.44▲▲▲中剂量组1023.2±1.6922.40±2.1232.60±3.27▲▲▲高剂量组1023.6±2.0722.20±1.9032.80±2.15▲▲▲注：与模型组比较，▲p＜0.05，▲▲p＜0.01,▲▲▲p＜0.001；与空白组比较，P＜0.05图1各组小鼠体重变化1.3.3补肾固表颗粒对小鼠脾重及脾脏系数的影响与空白对照组比较，模型组小鼠脾重差异有统计学意义（P＜0.05）；给药后，与模型组比较，玉屏风颗粒组、补肾固表颗粒各剂量组脾重与脾脏系数差异均有统计学意义（P＜0.05）。与玉屏风颗粒组比较，补肾固表颗粒高、中、低剂量组脾脏系数差异均无统计学意义（P＞0.05）。补肾固表颗粒高、中、低剂量之间脾脏系数差异无统计学意义（P＞0.05）。结果（见表3、图2~3）

山西中医药大学2020届研究生申请硕士学位论文8表3各组小鼠脾重与脾脏系数的比较（）组别n脾重（mg）脾脏系数(mg/g)空白对照组10120.56±10.17▲▲▲3.61±0.30模型组1093.3±13.94★★3.34±0.34玉屏风组10117.54±22.33▲▲3.87±0.70▲低剂量组10121.93±12.91▲▲▲4.02±0.42▲▲中剂量组10136.15±24.74▲▲▲4.45±0.56▲▲▲高剂量组10135.03±13.67▲▲▲4.37±0.57▲▲▲注：与模型组比较，▲p＜0.05，▲▲p＜0.01,▲▲▲p＜0.001；与空白组比较，★P＜0.05，★★P＜0.01图2各组小鼠脾脏重量比较图3各组小鼠脾脏系数比较1.3.4对小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响与空白对照组比较，模型组小鼠脾淋巴细胞增殖能力显著下降（P＜0.01）。给药后，

山西中医药大学2020届研究生申请硕士学位论文8表3各组小鼠脾重与脾脏系数的比较（）组别n脾重（mg）脾脏系数(mg/g)空白对照组10120.56±10.17▲▲▲3.61±0.30模型组1093.3±13.94★★3.34±0.34玉屏风组10117.54±22.33▲▲3.87±0.70▲低剂量组10121.93±12.91▲▲▲4.02±0.42▲▲中剂量组10136.15±24.74▲▲▲4.45±0.56▲▲▲高剂量组10135.03±13.67▲▲▲4.37±0.57▲▲▲注：与模型组比较，▲p＜0.05，▲▲p＜0.01,▲▲▲p＜0.001；与空白组比较，★P＜0.05，★★P＜0.01图2各组小鼠脾脏重量比较图3各组小鼠脾脏系数比较1.3.4对小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响与空白对照组比较，模型组小鼠脾淋巴细胞增殖能力显著下降（P＜0.01）。给药后，
【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 高小倩;高颂轶;赵文静;孙艳;;脾氨肽冻干粉对儿童反复呼吸道感染的临床疗效及对免疫功能的影响[J];国际免疫学杂志;2018年03期

2 丛莉莹;史晓东;;推拿治疗小儿反复呼吸道感染疗效观察[J];中国民间疗法;2015年09期

3 杨周剑;姜之炎;;姜之炎分期辨治小儿反复呼吸道感染经验撷萃[J];上海中医药杂志;2015年09期

4 孙政华;邵晶;郭玫;;黄芪化学成分及药理作用研究进展[J];中医临床研究;2015年25期

5 李平;李舫;秦中;孙小琴;;反复呼吸道感染患儿血清25-(OH)-D_3水平及其与体液免疫的关系[J];中国煤炭工业医学杂志;2015年05期

6 李晓菲;于河;甄建华;刘铁钢;谷晓红;;谷晓红教授从胃肠积热论治小儿抽动症验案举隅[J];湖南中医药大学学报;2015年03期

7 顾申枫;吴春芳;谢桂芬;;细菌溶解产物防治儿童反复呼吸道感染临床疗效评估[J];中国实用儿科杂志;2015年03期

8 曾静;;论中医药治疗小儿反复呼吸道感染[J];亚太传统医药;2015年02期

9 周静冬;;虞坚尔教授治疗小儿反复呼吸道感染临床经验[J];南京中医药大学学报;2014年06期

10 杨延源;张华;李站领;许秀辉;钟辉耀;陈如华;;匹多莫德对呼吸道感染患儿免疫功能影响的多中心研究[J];中国生化药物杂志;2014年07期

相关博士学位论文 前1条

1 杨雯轩;感毒清颗粒对免疫功能影响的实验和临床研究[D];成都中医药大学;2013年

相关硕士学位论文 前6条

1 郑源;芪丹复感颗粒对反复呼吸道感染患儿及免疫低下小鼠T细胞的影响[D];北京中医药大学;2017年

2 丁采苒;白术及其提取物免疫调节功能和机制研究[D];河南大学;2016年

3 陈娜;升麻素苷抗炎及抗小鼠肺损伤作用的研究[D];吉林大学;2014年

4 闫树丽;双表法对RSV感染小鼠肺炎模型NF-κB、TNF-α调节作用的实验研究[D];辽宁中医药大学;2014年

5 罗文薇;清消防感颗粒对儿童反复呼吸道感染及TNF-α影响的研究[D];北京中医药大学;2012年

6 张燕;益气活血方防治小儿反复呼吸道感染的机理研究[D];山东中医药大学;2006年

本文编号：2866595