ML355对小鼠经脂多糖诱导的炎症反应的拮抗效应及其分子机制

发布时间：2020-11-04 04:59

　　 目的:研究12-脂氧合酶(12-Lipoxygenase,12-LOX)抑制剂ML355对小鼠经脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的炎症反应的拮抗效应及其分子机制。方法:1.将24只成年雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为4组,对照组、LPS组(腹腔注射 LPS 20mg/kg)、ML355 预治疗组(30mg/kg、15mg/kg 的 ML355 提前1h腹腔注射+LPS)。建模后12h处死小鼠,收集外周血、腹腔灌洗液和腹腔巨噬细胞,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆和腹腔灌洗液中12羟基二十碳四烯酸(12-HETE)含量,测定腹腔灌洗液中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL-1β、IL-6、IL-10)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平及血清中IFN-y、IL-1β水平,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中IFN-y、IL-1β及花生四烯酸-15-脂氧合酶(Alox-15)的 mRNA 表达。2.体外培养小鼠原代腹腔巨噬细胞(PMs),随机分为4组,对照组、LPS组(LPS 20mg/L)、ML355 预处理组(25μmol/L、50μmol/L 的 ML355 提前干预 1h+LPS)。于LPS作用不同时间点收集各组的细胞上清和细胞团块。用qRT-PCR检测细胞中IFN-γ、IL-1β 及 Alox-15 的 mRNA 表达,ELISA 检测细胞上清液中 12-HETE、IFN-γ、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平,通过蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测12/15-LOX及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路蛋白的表达。结果:1.LPS模型组血浆和腹腔灌洗液中12-HETE的含量较对照组显著增高。与LPS模型组比较,ML355预处理后可明显减少血浆和腹腔灌洗液中12-HETE含量,明显降低血清和腹腔灌洗液中IFN-γ水平,qRT-PCR结果显示ML355明显下调IFN-γ、IL-1β及Alox15基因表达。2.在体外实验中,与对照组比较,LPS刺激腹腔巨噬细胞后,上清中12-HETE含量呈升高趋势,但没有统计学差异,予以ML355预处理后12-HETE含量明显降低。与LPS组比较,ML355预处理后细胞上清IFN-γ水平显著下降,细胞内IFN-γ、IL-1β的基因表达明显下调,p38 MAPK的磷酸化水平差异无显著变化,而细胞外信号调控蛋白激酶(ERK)、c-Jun N末端激酶(JNK)的磷酸化水平及12/15-LOX蛋白表达减少。结论:(1)ML355可抑制小鼠经LPS诱导的炎症反应。(2)ML355能明显降低LPS刺激下炎性巨噬细胞中炎性因子IFN-γ的生成,其机制可能是通过抑制12/15-LOX、p-ERK、p-JNK 蛋白来实现的。
【学位单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R965
【部分图文】：

遵义医科大学硕士学位论文?王星玉??示差异具有统计学意义。??２结果??以下所有的实验结果中，对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ组）缩写为Ｃ，?ＬＰＳ模型组缩写为Ｌ，??ＭＬ３５５?（１５ｍｇ／ｋｇ）?＋ＬＰＳ?组缩写为?Ｍ?（１５）?＋Ｌ，ＭＬ３５５?（３０ｍｇ／ｋｇ）?＋ＬＰＳ?组缩写为??Ｍ?（３０）?＋Ｌ。??２．１各组小鼠血浆和腹腔灌洗液中１２－ＨＥＴＥ的含量??实验结果显示，与对照组比较，ＬＰＳ模型组血浆和腹腔灌洗液中１２－ＨＥＴＥ的含??量显著增髙（尸＜０．０５），而ＭＬ３５５预处理后可明显降低血浆和腹腔灌洗液中１２－ＨＥＴＥ??含量（尸＜０．０５）。??Ａ??２５?ｒ?Ｂ??Ｕ?＾?１０００?－??Ｉ?ｉ?Ｉ?８００?＇?ＪＬ??Ｉ?ｉ?ｉ?６００?－?Ｉ?＾??ｓ?１１１?１２〇：ｔｉ?ｌｌｉ??ｃ?ｖ?ｙ?ｚ?ｃ?ｖ?，，??图１各组小鼠血浆和腹腔灌洗液中１２－ＨＥＴＥ的含量??注：与对照组相比，＃Ｐ＜０．０５；与ＬＰＳ模型组相比，＊Ｐ＜０．０５？??２．２?ＭＬ３５５对ＬＰＳ模型小鼠腹腔灌洗液中炎性因子的影响??建模后１２ｈ，ＬＰＳ模型组腹腔灌洗液中炎性因子（ＩＦＮ－Ｙ、ＩＬ－ｌｐ、ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－６、ＩＬ－１０）??水平显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），ＭＬ３５５预处理后ＩＬ－ｌｐ、ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－６、ＩＬ－１０?７ＪＣ平??无明显变化（办０．０５）。与ＬＰＳ模型组比较，ＭＬ３５５预处理后ＩＦＮ－Ｙ水平下降了，??且差异有统计学意义（尸＜〇．〇５）。??１７??

遵义医科大学硕士学位论文?王星玉??Ａ?Ｂ??４００?ｒ?１５０?ｒ?＃??ｉｍｖ?：Ｌｉｉｉ??Ｃ?Ｖ?、ｘＶ?、ｘＶ?。?Ｖ?、ｘＶ?、ｘＶ??Ｃ?Ｄ??２０００「?＃?＿?２００?ｒ?＃??ｌ?１５００?■?■?＿?Ｉ?１５０?ＩＴ??丨：Ｌ?１１１?ｉ：：Ｌｉｉｉ??。?Ｖ?、ｘｖ?ＸＶ?。?Ｖ?，Ｖ?＞＞??Ｅ??８００?ｒ??ｆ?６〇０?＇?＃?ｉ?丄??ｉ４〇°－?ｉｌｊ??Ｕ?Ｊ?Ｊ??Ｃ?ｖ?、ｘＶ?、ｘｖ??图２?ＭＬ３５５对ＬＰＳ模型小鼠腹腔灌洗液中炎性因子的影响??注：与对照组相比，＃Ｐ＜０．０５；与ＬＰＳ模型组相比，＊Ｐ＜０．０５？??１８??

遵义医科大学硕士学位论文?王星玉??２．３?ＭＬ３５５对ＬＰＳ模型小鼠血清中促炎因子的影响??建模后１２ｈ，ＬＰＳ模型组血清中促炎因子（ＩＦＮ－ｙ、ＩＬ－ｌｐ）水平显著高于对照组??（尸＜０．０５），ＭＬ３５５预处理后ＩＬ－１｜３水平无明显变化（Ｊ°＞０．０５）。与ＬＰＳ模型组比较，??ＭＬ３５５预处理后ＩＦＮ－ｙ水平明显降低（尸＜０．０５）。??Ａ?Ｂ??４００?ｒ?１５０?ｒ??Ｉ?３〇０?Ｉ?Ｉ?１００１?■??１?Ｌｉｕ?１?Ｌ?■?１１??Ｃ?Ｖ?、ｘＶ?、ｘｖ?。?ｖ?、ｘＶ?、ｘｖ??图３?ＭＬ３５５对ＬＰＳ模型小鼠血清中促炎因子的影响??注：与对照俎相比，＃尸＜０．０５；与ＬＰＳ模型组相比，＞＜０．０５。??２．４?ＭＬ３５５对ＬＰＳ模型小鼠ＰＭｓ中炎性因子ＩＦＮ￣ｙ、ＩＬ－ｉｐ及Ａｌｏｘｌ５??ｍＲＮＡ表达的影响??建模后１２ｈ，ＬＰＳ模型组中炎性因子ＩＦＮ－丫、ＩＬ－ｉｐ的ｍＲＮＡ表达较对照组明显??上调（Ｐ＜０．０５?），而ＬＰＳ模型组与对照组相比，Ａｌｏｘｌ?５?ｍＲＮＡ表达无明显变化（办０．０５?）。??与ＬＰＳ模型组比较，给予ＭＬ３５５后ＩＦＮ－ｙ、ＩＬ－ｌｐ及Ａｌｏｘｌ５基因表达水平明显下调??（尸＜０．０５）?〇??１９??
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本文编号：2869651