Netrin-1在急性淋巴细胞白血病中的表达及意义

发布时间：2020-11-05 13:23

　　 目的:研究儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的Netrin-1蛋白的表达水平和其与临床指标的相关性,并探讨Netrin-1调控ALL细胞的潜在机制。方法:采用ELISA法检测48例ALL患儿和27例非肿瘤疾病对照患儿外周血血清中的Netrin-1水平,比较疾病组和对照组患儿的血清Netrin-1水平并分析Netrin-1水平与ALL临床指标的相关性。体外培养人白血病细胞株:Jurkat、Molt-4、SUP-B15和Raji,经不同浓度(0~200 ng/ml)Netrin-1蛋白处理后,采用Transwell法检测各组细胞的侵袭能力;采用CCK8法检测各组细胞增殖的能力;采用Western blot检测各组细胞内FAK、ERK1/2、PI3K、AKT信号通路关键蛋白的磷酸化水平。结果:ALL患儿血清中的Netrin-1表达水平显著高于对照组(P0.05)。Netrin-1表达水平与外周血白细胞(WBC)水平和外周血血小板(PLT)水平呈显著相关:随着Netrin-1表达水平升高,WBC水平总体(r=-0.290,P0.05)呈下降趋势,PLT水平(r=0.483,P0.05)呈上升趋势,但当Netrin-1浓度处于25~50 ng/ml水平时,Netrin-1水平与WBC(r=0.886,P0.05)呈正相关;WBC大于50×10~9/L和PLT小于20×10~9/L时,患儿的Netrin-1表达水平均处于25~50 ng/ml,呈显著降低(P=0.042,P=0.001);Netrin-1表达水平与年龄、Hb、骨髓幼稚细胞无显著相关性。危险度分级中,高危组中的Netrin-1表达水平显著增高,具有显著性差异(P=0.017);Netrin-1表达水平在MRD、中枢神经浸润、遗传学异常等分组中的无显著性差异。Transwell实验结果表明,Netrin-1促进4种白血病细胞株的侵袭能力(P0.05):随着Netrin-1浓度增高,侵袭下室的细胞数有先增加后降低的趋势;4种细胞均在Netrin-1浓度为100 ng/ml时,侵袭下室的细胞数最高。不同浓度Netrin-1对细胞增殖的影响不同:4种细胞存活率均表现为低浓度升高及高浓度降低的趋势;Netrin-1浓度为25 ng/ml时,细胞存活率均较无Netrin-1添加状态显著增加(P0.05),其中SUP-B15细胞在浓度为100 ng/ml时,细胞存活率最高。Netrin-1使FAK、Erk1/2、PI3K(P85/55)、Akt信号通路关键分子磷酸化水平显著上升(P0.05)。结论:Netrin-1在儿童ALL中存在异常的表达;不同的Netrin-1表达水平与临床指标的关系不同,提示不同浓度Netrin-1水平可能对患儿的影响不同;Netrin-1可能通过激活MAPK信号通路与PI3K信号通路来促进白血病细胞的增殖、侵袭能力进而影响ALL的发生发展,但其在不同浓度区间呈现差异的影响效果,提示Netrin-1依据自身浓度差异可能具有不同的调控机制。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R733.71
【部分图文】：

重庆医科大学硕士研究生学位论文19图1ELISA法测定ALL患儿与非白血病对照者的Netrin-1表达水平Figure1Netrin-1expressionleveldeterminedbyELISAinALLpatientsandnon-leukemiacontrols.

重庆医科大学硕士研究生学位论文23表5不同浓度Netrin-1处理的Jurkat、Molt-4、SUP-B15、Raji细胞跨膜细胞数Table5NumberoftransmenmbranecellsinJurkat、Molt-4、SUP-B15、RajicellstreatedwithdifferentconcentrationofNetrin-1NumberofcellsNetrin-1(ng/ml)02550100200Jurkat72.333±6.252677.400±10.03472.533±5.462479.133±7.472*76.333±5.960Molt-475.933±5.07880.533±5.488*87.333±4.287*87.533±4.824*85.267±3.634*Sup-B1574.800±4.34674.800±4.19580.067±6.5078*80.867±3.563*78.867±3.523Raji71.600±6.25477.067±9.22381.267±10.707*91.267±12.848*84.867±9.288**P＜0.05,comparedwithgroupwithoutNetrin-1addition(0ng/ml).图2不同浓度Netrin-1对细胞侵袭能力的影响（A:Jurkat.B:SUP-B15.C:Molt-4.D;Raji.结晶紫染色，×40）Figure2TheeffectofcellsmigrationabilityaftertreatmentwithdifferentconcentrationsofNetrin-1.（A:Jurkat.B:SUP-B15.C:Molt-4.D;Raji.Crystalvioletdyeing，×40）

重庆医科大学硕士研究生学位论文24图3不同浓度的Netrin-1处理不同时间后的细胞存活率Netrin-1浓度：0、25、50、100、200ng/mlFigure3CellsurvivalrateaftertreatmentwithdifferentconcentrationsofNetrin-1ConcentrationofNetrin-1：0、25、50、100、200ng/ml3.6Netrin-1对Jurkat、Molt-4、SUP-B15、Raji细胞增殖、粘附、侵袭信号通路的影响WesternBlot分析发现在Jurkat、Molt-4、SUP-B15、Raji4种白血病细胞株中，Netrin-1应用20min后，均不同程度上调了FAK、Erk1/2、PI3K(P85/55)、Akt的蛋白磷酸化水平，相应总蛋白水平没有变化，有显著性差异。结果显示，Netrin-1激活了MAPK(Erk),PI3K/Akt通路，影响了相关蛋白的表达（图4）。
【参考文献】

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本文编号：2871691