miR-20a通过作用于DOCK4影响宫颈癌细胞的侵袭能力

发布时间：2020-11-09 10:31

　　 目的:探讨mi R-20a的表达水平对宫颈癌细胞siha迁移与侵袭的影响,并且进一步研究mi R-20a与下游靶基因DOCK4之间的关系以及mi R-20a的表达水平对DOCK4表达的影响,研究mi R-20a与宫颈癌发生发展之间的可能机制。方法:培养宫颈癌细胞Siha,通过转染mi R-20a mimics以及mi R-20a inhibitor构建mi R-20a的高、低表达模型,先进行oligo的细胞转染效率,然后通过细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测宫颈癌细胞Siha的迁移、侵袭能力的变化。另外,生物学信息分析mi R-20a的下游靶基因,然后培养宫颈癌细胞Hela,先分别进行oligo、质粒的细胞效率评价转染,通过构建双荧光酶报告基因载体后行双荧光素酶报告系统检测来验证下游靶基因与mi R-20a的结构性结合作用,同时利用Western Blot实验检测靶基因DOCK4蛋白水平的表达。结果:1.细胞转染后,各组细胞中mi R-20a相关序列的转染效率达到70%以上,与mimics NC组相比,mi R-20a mimics组的细胞迁移能力升高(P=0.025),侵袭能力上升(P=0.018);而与inhibitor NC组相比,mi R-20a inhibitor组的细胞迁移能力降低(P=0.023,侵袭能力下降(P=0.032);2.经生物信息学分析预测DOCK4为mi R-20a的潜在靶点之一,用双荧光素酶实验对其验证显示,共转染野生型DOCK4-Wt报告载体和mi R-20a mimics时,细胞荧光素酶活性明显被抑制;而共转染突变型DOCK4-Mut报告载体和mi R-20amimics细胞荧光素酶活性无明显变化。3.细胞转染后,与mimics NC组相比,mi R-20a mimics组细胞中DOCK4表达升高(P=0.001);而与inhibitor NC组相比,mi R-20a inhibitor组细胞中的DOCK4表达降低(P=0.01)。结论:1.宫颈癌中,mi R-20a表达上调促进宫颈癌细胞的迁移与侵袭参与宫颈癌的发生发展;2.mi R-20a通过靶向DOCK4并正向调节DOCK4实现其在宫颈癌发生发展中的作用。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R737.33
【文章目录】：
摘要
Abstract
常见缩写词中英文对照表
前言
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 实验方法
2 结果
    2.1 miR-20a表达水平对宫颈癌细胞迁移、侵袭影响
    2.2 miR-20a靶向作用于DOCK4 并上调其表达
3 讨论
4 结论
    4.1 miR-20a的表达对宫颈癌细胞迁移、侵袭的影响
    4.2 miR-20a靶向DOCK4 在宫颈癌细胞中发挥作用
参考文献
综述
    参考文献
致谢
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本文编号：2876289