九香虫小分子化合物分离纯化及其对锰致TM4细胞损伤的干预作用

发布时间：2020-11-09 11:49

　　 目的:为探究中药昆虫九香虫的有效成分,通过九香虫的小分子化合物分离纯化及其对锰损伤后TM4细胞的干预作用研究,进一步验证PI3K/c-Src/FAK信号通路在支持细胞损伤中的作用。方法:1.采用传统中药提取、高效液相色谱、硅胶柱色谱等分离方法对九香虫小分子化合物进行分离纯化。2.采用MTS法检测氯化锰溶液对细胞损伤的IC50和九香虫小分子化合物对细胞是否有毒性作用,以及九香虫小分子化合物干预锰致TM4细胞损伤后的存活率。3.采用TUNEL法检测九香虫小分子化合物干预锰致TM4细胞损伤前后的凋亡率。4.采用划痕法和Transwell实验检测九香虫小分子化合物干预锰致TM4细胞损伤前后的细胞迁移情况。5.采用免疫荧光、Western Blot检测PI3K/c-Src/FAK信号转导通路中蛋白的表达情况。结果:1.从九香虫中分离出15种单体化合物,其中多巴胺衍生物5种,甘油酯类化合物1种,生物碱类化合物2种,酸类化合物3种,氨基酸类化合物2种,核苷酸类化合物1种和核苷类化合物1种。化合物1为一种新的多巴胺衍生物。2.本研究分离得到的九香虫小分子化合物5可以提高锰致TM4细胞损伤的存活率以及降低其凋亡率。3.本研究分离得到的九香虫小分子化合物5可以改善锰损伤后TM4细胞的迁移能力。4.九香虫化合物5可以增加锰损伤的支持细胞PI3K/c-Src/FAK信号通路上FAK以及相关紧密连接蛋白Occludin、Claudin-1蛋白的表达,并降低Src蛋白的表达。结论:1.从九香虫中分离出15种单体化合物,其中4种化合物是九香虫中的未知成分,包括1种新的多巴胺衍生物。2.九香虫中分离出的化合物5可以改善锰导致的TM4细胞损伤,其作用机制与PI3K/c-Src/FAK信号通路有关。
【学位单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

遵义医科大学硕士论文徐天天9图1-1九香虫小分子化合物的化学结构式Figure1-1ChemicalstructuresofthesmallmolecularcompoundsfromCotidiuschinensis

巴胺衍生物[14]。H-6到C-1"、H-8到C-1"（δC198.7）、H-2"到C-1"和H-2"到C-7的HMBC关联（图2）证实了羰基位于C-1"。H-2与C-8a的HMBC关联表明C-2和C-8a存在一个环氧桥，H-3与C-4a的HMBC关联推断出C-3和C-4a存在另一个环氧桥，H-3与C-3a（δC173.4）的HMBC关联表明C-1存在乙酰氨基。H-2/H-3（J=7.3hz）的邻端耦合常数与molossusamideA[14]的结果一致，表明存在反式-H-2/H-3关系。化合物1的绝对构型为2S，3R，这是基于其圆二色性（CD）光谱在286nm处的科顿效应[15]。因此，化合物1的结构被建立并命名为cotidioneA.。图1-2化合物1的HMBC相关Figure1-2KeyHMBCofcompound1

遵义医科大学硕士论文徐天天26图2-1多巴胺衍生物对TM4细胞存活率的影响。注：*表示与空白组相比差异有统计学意义(P<0.05)。表2-7多巴胺衍生物对TM4细胞存活率的影响(±,n=6)Table2-7EffectofdopaminederivativesonTM4cellsurvival(±,n=6)化合物浓度(μg/ml)化合物1化合物2化合物3化合物4化合物50100.000±0.0000100.000±0.0000100.000±0.0000100.000±0.0000100.000±0.00002.594.355±12.609288.403±6.2669*99.331±5.661592.363±18.920995.387±17.5977596.267±11.472489.175±8.0017*95.179±5.995094.978±5.016896.711±3.24491099.318±5.7319101.939±7.481996.227±7.4753109.372±3.4080*104.150±6.61892094.558±5.0325101.481±11.012996.580±16.1629100.981±9.8246100.760±8.8621
【参考文献】

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本文编号：2876385