紫河车药材的质量标准研究

发布时间：2020-11-10 12:58

　　 紫河车(PlacentaHominis)是经过加工过后的人体胎盘,又称为胞衣等。紫河车的药用历史可以追述有几百年,且其使用于当下在不停的发展中,古今使用史均证明其在临床上有较好的疗效。正因为如此,加上作为中药材紫河车来源的特殊性,近年来其市场价格也是水涨船高。不少非法分子用猪、牛、羊来源的胎盘充当紫河车,同时还有掺假及炮制不当所导致的盐、淀粉、糖、重金属含量过高,血液清洗不彻底,还有来自于携带病毒产妇的胎盘等现象,给市场和患者带了极其恶劣的影响。而现行标准只有简单的性状描述,完全达不到甄别优劣的目的。因此有必要进行对其质量标准进行全面的提高。本文对15批紫河车分别进行了性状、鉴别(显微、薄层、HPLC、SDS-PAGE)、检查(水分、总灰分、猪牛羊掺伪、病毒、重金属及有害元素)、含量测定(总氮量、孕酮、人绒毛促性腺激素)研究,实验研究表明,显微鉴别、薄层鉴别、HPLC鉴别和SDS-PAGE鉴别都未能有效显示正品紫河车和常见猪胎盘、牛胎盘、羊胎盘伪品的区别。而进行实时荧光定量PCR法对紫河车进行定性鉴别,并采用对照药材作为随行对照,结果证明,紫河车正品和常见猪胎盘、牛胎盘、羊胎盘伪品都能够得到有效的区分,且重现性较好,因此将其列入标准草案;分别采用酶标法检查乙肝病毒、酶联免疫法检查艾滋病毒抗体和甲肝抗体,其结果都能够正常反应所检紫河车药材的真实情况。同时根据实验所测数据,也对水分、总灰分以及重金属及有害元素等四项常规检查项进行了标准拟定。在采用微粒子酶促化学发光法对紫河车药材中的人绒毛膜促性腺激素(βhCG)和孕酮的含量测定研究中结果显示,此法所测得紫河车中的βhCG水平乘次不齐,且不稳定,所以此项测定不适用于建立标准。相比较而言,使用同样的检测方法对紫河车中成分稳定的孕酮进行测定研究时发现,其在药材中的含量相对稳定,重现性好,灵敏度高,可以列入标准。
【学位单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R284.1
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一章 文献综述
    1.1 紫河车的化学成分及药理作用
    1.2 紫河车的疗效及临床应用
        1.2.1 激素样作用
        1.2.2 免疫调节作用
        1.2.3 抗感染作用
        1.2.4 营养和生长因子作用
        1.2.5 抗缺氧耐疲劳作用
    1.3 紫河车质量控制研究现状（现行标准、历史沿革、已有研究）
        1.3.1 现行标准
        1.3.2 历史沿革
        1.3.3 已有研究
    1.4 紫河车目前市场情况和面临的问题
    1.5 检测方法的介绍
    参考文献
第二章 紫河车的性状
第三章 紫河车的鉴别
    3.1 显微鉴别研究
    3.2 薄层色谱鉴别研究
        3.2.1 仪器及试药
        3.2.2 实验方法及内容
        3.2.3 实验结果
    3.3 HPLC法对紫河车鉴别的研究
        3.3.1 仪器与试药
        3.3.2 色谱条件
        3.3.3 样品溶液的制备
    3.4 SDS-PAGE电泳鉴别研究
        3.4.1 仪器与试药
        3.4.2 蛋白提取过
        3.4.3 标准曲线定蛋白
        3.4.4 实验结果
    3.5 TaqMan real-time PCR法鉴别研究
        3.5.1 仪器与试药
        3.5.2 DNA的提取
        3.5.3 实时荧光定量PCR反应
        3.5.4 结果
    3.6 基于COI序列的DNA条形码的鉴定研究
        3.6.1 DNA的提取
        3.6.2 COI引物合成
        3.6.3 PCR扩增（50μL体系）
        3.6.4 基因测序
        3.6.5 数据处理
        3.6.6 讨论
    参考文献
第四章 检查项
    4.1 水分测定（烘干法）
    4.2 总灰分测定
    4.3 病毒的定性检测研究
        4.3.1 酶标法检测乙肝病毒表面抗原
        4.3.2 酶标法检测甲肝病毒抗体和人类免疫缺陷病毒抗体
        4.3.3 酶标法检测人类免疫缺陷病毒HIV1/HIV2抗体
    4.4 TaqMan real-time PCR法检测猪、牛、羊掺伪品
        4.4.1 材料与实验准备
        4.4.2 主要试剂及仪器
        4.4.3 样品溶液的制备
        4.4.4 实验内容
        4.4.5 讨论
    4.5 异常掺入物（镁盐、铝盐、淀粉、糖）检查方法研究
    4.6 ICP-MS法检测重金属及有害元素
        4.6.1 仪器与试药
        4.6.2 溶液的制备
        4.6.3 标准曲线的制备
        4.6.4 供试品溶液的制备
        4.6.5 测定方法
        4.6.6 方法学考察
        4.6.7 样品测定
        4.6.8 结果与讨论
    参考文献
第五章 紫河车的含量测定
    5.1 总氮量测定
        5.1.1 仪器及试药
        5.1.2 实验内容
        5.1.3 方法学考察
        5.1.4 讨论
    5.2 微粒子酶免化学发光法（CMIA）检测人绒毛膜促性腺激素及孕酮的含量
        5.2.1 仪器与试药
        5.2.2 供试品溶液的制备
        5.2.3 质控品使用前的准备
        5.2.4 测定方法
        5.2.5 测定结果
            5.2.5.1 人绒毛膜促性腺激素标准曲线和线性回归方程
            5.2.5.2 样品的人绒毛膜促性腺激素含量测定
            5.2.5.3 孕酮的定标准曲线
            5.2.5.4 样品的孕酮含量测定
        5.2.6 方法学考察
            5.2.6.1 提取液的选择
            5.2.6.2 精密度实验
            5.2.6.3 灵敏度实验
        5.2.7 讨论
创新与展望
参考文献
附录 紫河车药材质量标准草案
致谢

【参考文献】

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本文编号：2877955