硫化氢在肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤中对氧化应激作用的研究

发布时间：2020-11-16 14:57

　　 目的:观察硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS,外源性硫化氢供体)预处理大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52SE)后,是否能减轻肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤中氧化应激的发生。方法:随机将大鼠肾小管上皮细胞分为四组:空白对照组(Control组):细胞培养箱环境为37℃+95%空气+5%二氧化碳+饱和湿度,放入细胞培养150分钟,然后收集细胞。缺氧复氧组(HR组):细胞培养箱环境为37℃+95%氮气+1%氧气+4%二氧化碳+饱和湿度,放入细胞培养60分钟后立即转移至37℃+95%空气+5%二氧化碳+饱和湿度环境的细胞培养箱中培养90分钟,然后收集细胞。NaHS干预组(NaHS组):在浓度为100μmol/L的NaHS无血清培养液中,细胞培养箱环境为37℃+95%氮气+1%氧气+4%二氧化碳+饱和湿度,放入细胞培养60分钟后立即转移至37℃+95%空气+5%二氧化碳+饱和湿度环境的细胞培养箱中培养90分钟,然后收集细胞。二苯基氯化碘盐(diphenylene iodonium,DPI)干预组(DPI组):在浓度为1μmol/L的DPI无血清培养液中,细胞培养箱环境为37℃+95%氮气+1%氧气+4%二氧化碳+饱和湿度,放入细胞培养60分钟后立即转移至37℃+95%空气+5%二氧化碳+饱和湿度环境的细胞培养箱中培养90分钟,然后收集细胞。蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测各组细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶(NOX)2和NOX4的蛋白表达。实时荧光定量PCR法(RT-PCR法)检测各组细胞中NOX2和NOX4的mRNA的表达。荧光探针2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)法检测各组细胞中活性氧簇(ROS)的含量。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞中NADPH氧化酶的活性。结果:与Control组比较,HR组细胞的NOX2、NOX4的蛋白含量和mRNA含量表达显著增加(均P0.05),ROS含量明显增加(P0.01),NADPH氧化酶活性明显增高(均P0.01)。与HR组比较,NaHS组和DPI组细胞的NOX2、NOX4的蛋白含量和mRNA含量表达均下降(均P0.05),ROS含量均减少(均P0.01),NADPH氧化酶活性均降低(均P0.01)。结论:硫化氢在大鼠肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤过程中可以通过减少NOX2、NOX4的mRNA和蛋白的表达,降低ROS的含量,降低NADPH氧化酶的活性来减轻肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤中氧化应激的发生。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R692
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
常用缩写词中英文对照表
前言
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 实验方法
    1.3 统计学分析
2 结果
3 讨论
4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
个人简历

【参考文献】

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本文编号：2886366