转染TRA2B siRNA对肺腺癌A549细胞凋亡的影响并老年肺癌病例临床分析
本文关键词:转染TRA2B siRNA对肺腺癌A549细胞凋亡的影响并老年肺癌病例临床分析,由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】:目的:TRA2B是富含有丝氨酸/精氨酸的蛋白家族成员之一,它其中一个重要的功能是参与前体mRNA的选择性剪接,既往研究发现TRA2B在宫颈癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌、结肠癌等多种恶性肿瘤中高表达,目前已经有以TRA2B为靶点的肿瘤基因治疗,并且获得了初步的成果,但是国内外关于TRA2B基因在肺癌的研究依然很少。本实验通过运用RNA干扰技术,将si RNA-TRA2B成功转染至肺腺癌A549细胞后,观察A549细胞的细胞形态学变化和对A549细胞凋亡的影响,以及TRA2B在A549细胞上的表达情况,探索TRA2B在肺癌发生中的作用,为进一步将TRA2B作为靶点的肺癌基因靶向治疗提供理论性的依据。分析老年肺癌患者的病例,讨论影像学检查在肺癌的早期诊断及早期治疗的意义。方法:设计针对肺腺癌TRA2B基因的siRNA-TRA2B,利用脂质体Lipofectamine TM 2000,将构建好的siRNA-TRA2B成功转染至肺腺癌A549细胞,运用显微镜观察细胞的形态学变化;运用Real-time PCR技术检测TRA2B mRNA的表达水平,并筛选出最有效的干扰RNA;运用Western blot技术检测TRA2B的蛋白表达水平,并筛选出最有效的干扰RNA;选择干扰效果最好的siRNA-TRA2B转染,运用流式细胞术检测转染siRNA-TRA2B后A549细胞的凋亡水平,运用Western blot技术检测转染si RNA-TRA2B后A549细胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达水平,探讨转染siRNA-TRA2B后,对Bcl-2、Bax表达的影响。通过选择3例老年肺癌患者的病例,将影像学检查与术后的病理结果进行对比分析,探讨影像学检查对肺癌的早期发现的重要临床价值。结果:利用脂质体LipofectamineTM 2000,将siRNA-TRA2B成功转染至肺腺癌A549细胞后:(1)显微镜下观察A549细胞发现:转染前,细胞状况良好,贴壁生长,多呈梭形,细胞质饱满,大小适中,核仁清晰,转染24、48h后细胞皱缩,贴壁不佳,转染效率达到90%以上。(2)Real-time PCR检测TRA2B mRNA的表达水平,并筛选出干扰效果最好的siRNA,结果显示:siRNA-TRA2B作用于A549细胞24h,48h后,TRA2B mRNA表达明显下调,而Mock组、Negative Control组及Black组的mRNA表达水平无明显变化,同时筛选出1-TRA2B-homo-544组干扰效果最好。(3)Western blot检测TRA2B蛋白的表达水平,并筛选出干扰效果最好的siRNA,结果显示:siRNA-TRA2B作用于A549细胞24h,48h后,TRA2B蛋白的表达明显下降,而Mock组、Negative Control组及Black组的蛋白表达水平无明显变化,同时筛选出1-TRA2B-homo-544组干扰效果最好。(4)流式细胞术检测干扰效果最好的siRNA-TRA2B组的细胞凋亡水平,结果显示:siRNA-TRA2B组凋亡率(48.02±0.495)%,Negative Control组凋亡率(8.60±0.251)%,Mock组凋亡率(8.47±0.156)%,Black组凋亡率(9.10±0.355)%,siRNA-TRA2B组与Mock组、Negative Control组及Black组比较,差异有统计学意义(P0.05),Mock组、Negative Control组与Black组之间两两比较,差异无统计学意义(P0.05),转染siRNA-TRA2B后可促进细胞凋亡。(5)Western blot技术检测干扰效果最好的siRNA-TRA2B组的凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达水平,结果显示:siRNA组A549细胞中凋亡蛋白Bcl-2的表达水平明显下降,Bax的表达水平明显上升,而Mock组、Negative Control组及Black组的Bcl-2、Bax的表达水平无明显变化。3例老年肺癌患者的影像学结果与病理结果一致,因此,影像学检查可以作为肺癌的早期发现的重要手段。结论:通过应用RNA干扰技术,可下调A549细胞中TRA2B的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,TRA2B将有可能成为肺癌基因治疗的一个新靶点。影像学检查对老年病人肺癌的早期的发现及早期的诊治有着重要的意义。
【关键词】:TRA2B siRNA 肺癌 A549 细胞
【学位授予单位】:大连医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R734.2
【目录】:
- 摘要6-8
- Abstract8-11
- 第一部分 基础研究11-34
- 前言11-13
- 材料与方法13-19
- 结果19-26
- 讨论26-30
- 结论30-31
- 参考文献31-34
- 第二部分 临床病例分析34-36
- 病例摘要34-35
- 讨论35-36
- 综述 SR蛋白及TRA2蛋白在恶性肿瘤研究中的进展36-45
- 参考文献41-45
- 附录45-46
- 致谢46-47
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 常秀青 ,Tony Sheldon;低焦油含量香烟与肺腺癌发病率上升有关[J];英国医学杂志(中文版);2002年01期
2 邓小梅,何权瀛;细支气管肺泡细胞癌与其他类型肺腺癌的对比分析[J];中国呼吸与危重监护杂志;2005年03期
3 杨长青;王莲芳;;飞行人员右肺腺癌1例[J];海军医学杂志;2006年04期
4 陈小兵;闫明;罗素霞;李宁;邹宏志;韩黎丽;;84例青年肺腺癌早期误诊原因分析[J];实用诊断与治疗杂志;2007年09期
5 陈小兵;闫明;曾军杰;罗素霞;;青年女性肺腺癌首发症状及早期误诊原因分析[J];中国现代医生;2009年06期
6 周琪;段亮;姜格宁;丁嘉安;;青年男性肺腺癌临床特征对预后的影响[J];中国癌症杂志;2009年08期
7 张文丽;;以高热为首发症状的肺腺癌病例并文献复习[J];甘肃医药;2013年07期
8 郭哲;肺腺癌病人的预防性头颅照射[J];国外医学(肿瘤学分册);1988年06期
9 刘福升,李险峰,杨爱民,王彤;肺腺癌误诊肺结核16例分析[J];中国防痨杂志;1994年01期
10 余伟江;放疗及合并化疗治疗Ⅲ期肺腺癌疗效分析[J];肿瘤防治研究;1994年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙强;顾春东;雷霆;王金;李锦绣;;浸润性周围型小肺腺癌(≤2cm)不同病理亚型的比较[A];第13届全国肺癌学术大会论文汇编[C];2013年
2 袁明远;;周围型肺腺癌病灶的放射学分类及其临床价值[A];中华医学会第16次全国放射学学术大会论文汇编[C];2009年
3 顾国浩;;生物芯片在肺腺癌诊断中的应用进展[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
4 林嘉颖;吴一龙;杨学宁;乔贵宾;王坤;陈刚;;不同预后的肺腺癌患者酪氨酸激酶信号传导通路异常的初步探讨[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年
5 汤秀英;吴立红;张烨;;肺腺癌的超微观察及异质性探讨[A];第八次全国电子显微学会议论文摘要集(Ⅰ)[C];1994年
6 徐芝君;应可净;;胸部CT基本正常肺腺癌伴慢性DIC一例并文献复习[A];浙江省医学会呼吸系病分会成立三十周年庆典活动暨2008年呼吸病学学术年会论文汇编[C];2008年
7 邵艳;洪伟俊;宁允叶;胥武剑;李强;;肺腺癌恶性转化相关蛋白的初步筛查[A];中华医学会呼吸病学年会——2011(第十二次全国呼吸病学学术会议)论文汇编[C];2011年
8 王恩华;;解读及评价国际多学科肺腺癌分类[A];2012年浙江省病理学学术年会论文集[C];2012年
9 宋正波;朱慧能;郭振英;吴伟;孙文勇;张沂平;;肺腺癌新分类在预测Ⅰ期非小细胞肺腺癌预后中的价值[A];第13届全国肺癌学术大会论文汇编[C];2013年
10 赵燕妮;曹菊;牟向东;阙呈立;;肺腺癌影像反复波动病例报告一例并文献复习[A];中华医学会呼吸病学年会——2013第十四次全国呼吸病学学术会议论文汇编[C];2013年
中国重要报纸全文数据库 前8条
1 丁香;日发现肺腺癌的预测因子[N];中国医药报;2007年
2 仇逸邋孙国根;吸烟丈夫的妻子,患肺腺癌风险高[N];新华每日电讯;2007年
3 曾理;肺腺癌早诊研究关注“起源”[N];健康报;2008年
4 记者 李天舒 胡德荣;为何不吸烟者也患肺癌[N];健康报;2010年
5 记者 胡德荣;非吸烟肺腺癌人群致癌基因突变谱建立[N];健康报;2011年
6 高原;或与MiR-21分子有关[N];广东科技报;2009年
7 海飞鱼;探索肺癌突变基因[N];医药经济报;2008年
8 健康时报记者 王志胜;一样的肿瘤,不一样治法[N];健康时报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙正亮;肺腺癌的分子分型特征及其与病理分型的关联研究[D];复旦大学;2014年
2 杨欣;肺腺癌预后相关的临床病理因素分析及分子病理研究[D];北京协和医学院;2014年
3 郑华;筛选肺腺癌相关血清自身抗体标志物[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2010年
4 张扬;肺腺癌致癌基因突变研究[D];复旦大学;2013年
5 张丽;基于IASLC/ATS/ERS国际多学科新分类的肺腺癌影像学及相关研究[D];北京协和医学院;2014年
6 杨继要;肺腺癌肿瘤相关抗原的筛选鉴定及克隆表达[D];郑州大学;2006年
7 何萍;染色体15q25.1区域基因多态性与中国南方人群肺腺癌易感性的关联研究[D];南方医科大学;2014年
8 李亚光;PI3K-Akt通路与肺腺癌术后患者预后的相关性研究[D];北京协和医学院;2012年
9 赵伟鹏;肺腺癌淋巴管生成相关基因的筛选和初步鉴定[D];第三军医大学;2009年
10 刘亚岚;水通道蛋白3在人体多种器官正常和癌组织中的表达及意义[D];中国医科大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 苏帆;rhPDCD5蛋白对肺腺癌A549细胞化疗作用的研究[D];石河子大学;2015年
2 卜静;顺铂联合雷帕霉素、3-MA对肺腺癌A549细胞及其裸鼠原位移植瘤的影响[D];河北医科大学;2015年
3 韩承刚;宝石CT灌注成像在肺腺癌生物治疗疗效评价中的应用价值[D];山西医科大学;2015年
4 展峰峰;肺腺癌患者组织中EML4-ALK融合基因与TYMS mRNA表达的关系[D];山西医科大学;2015年
5 赵玉泽;Ago2蛋白在EGFR突变的肺腺癌患者中的表达及临床意义[D];山西医科大学;2015年
6 孙天宇;转录辅助因子4过表达与肺腺癌淋巴转移和预后的相关性[D];第三军医大学;2015年
7 崔巍;肺腺癌患者外周血IL-17A~+T细胞和相关细胞因子检测及意义[D];浙江大学;2015年
8 赵凤芝;bFGF单抗联合Lobaplatin抑制肺腺癌细胞增殖、转移和诱导凋亡的机制研究[D];暨南大学;2015年
9 边猛;温通法联合化疗对EGFR-TKIs耐药后的脾肾阳虚型肺腺癌患者的临床疗效观察[D];河南中医学院;2015年
10 高正亚;Ⅰ期肺腺癌患者外周血和淋巴结中CK19及LUNX mRNA的表达与微转移的相关性研究[D];苏州大学;2015年
本文关键词:转染TRA2B siRNA对肺腺癌A549细胞凋亡的影响并老年肺癌病例临床分析,,由笔耕文化传播整理发布。
本文编号:289024
本文链接:https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/289024.html