新型小分子GLP-1R激动剂S6促进大鼠胰岛素分泌的初步机制研究

发布时间：2020-12-07 22:43

　　目的:筛选鉴定新型小分子GLP-1R激动剂S6对葡萄糖刺激的大鼠胰岛素分泌的影响及其机制。方法:1)基于药效团模型的虚拟筛选与分子对接技术相结合的方法筛选小分子化合物。2)FLIPR^?荧光成像检测系统检测筛选化合物与GLP-1R结合后细胞内钙离子浓度变化。3)胰岛素分泌实验观察不同条件下的S6对胰岛素分泌的作用。4)钙离子成像技术检测在不同条件下S6对胰岛β细胞内钙离子浓度的影响。5)全细胞膜片钳技术探究S6在不同条件下对胰岛β细胞电压依赖性钙（VDCC）通道、电压依赖性钾（Kv）通道以及动作电位时程的影响。6)利用CETSA技术观察S6对GLP-1R的靶向作用。结果:1)通过虚拟筛选和分子对接结合的方法从ZINC小分子数据库筛选出5809种化合物,后续进行基于口服化合物理化性质的筛选,有108种化合物符合要求,最终购买到30个商业性化合物。2)30个待测化合物中有16个化合物表现出GLP-1R激动效应,其中S6具有最高激动作用。3)胰岛素分泌结果表明,S6具有促进大鼠胰岛素分泌的作用。4)钙离子成像技术显示S6可增加细胞内Ca²⁺浓度。5)... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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前言
第一部分 小分子GLP-1R激动剂S6 的筛选
    1 材料与方法
        1.1 主要药品与试剂
        1.2 主要实验仪器
        1.3 主要溶液的配制
        1.4 计算机研究
        1.5 CHO-K1 细胞的培养
        1.6 钙离子荧光检测技术观察化合物对GLP-1R的激动活性
        1.7 数据处理
    2 结果
        2.1 虚拟筛选和化合物理化性质的计算
        2.2 S6 具有最强的GLP-1R激动作用
    3 讨论
    4 结论
第二部分 S6葡萄糖浓度依赖性促进大鼠胰岛素分泌及其电生理机制
    1 材料与方法
        1.1 实验动物
        1.2 主要药品与试剂
        1.3 主要实验仪器
        1.4 主要溶液的配制方法
        1.5 大鼠胰岛组织的分离与培养
        1.6 大鼠β细胞的分离与培养
        1.7 组织水平上的胰岛素分泌实验
        1.8 全细胞膜片钳实验
        1.9 钙离子成像技术实验
        1.10 数据处理
    2 结果
        2.1 S6 葡萄糖浓度依赖性的促进胰岛素分泌
        2.2 S6 升高β细胞内的钙离子浓度
        2.3 S6 未影响β细胞电压依赖性钙（VDCC）通道
        2.4 S6 抑制β细胞电压依赖性钾（Kv）通道,延长动作电位时程
        2.5 Kv通道部分参与S6 介导的胰岛素分泌作用
2+浓度升高">        2.6 细胞内钙库释放参与S6 介导的细胞内的Ca²⁺浓度升高
    3 讨论
    4 结论
第三部分 GLP-1R介导S6 性促进大鼠胰岛素分泌的机制研究
    1 材料与方法
        1.1 实验动物
        1.2 主要药品与试剂
        1.3 主要实验仪器
        1.4 主要溶液的配制方法
        1.5 大鼠胰岛组织及β细胞的分离与培养
        1.6 CETSA验证GLP-1R与 S6 靶向作用
        1.7 观察GLP-1R对 S6 诱导的胰岛素分泌的影响
        1.8 观察S6 抑制Kv通道电流与GLP-1R的关系
2+浓度的影响">        1.9 观察GLP-1R对 S6 升高细胞内的Ca²⁺浓度的影响
        1.10 数据处理
    2 结果
        2.1 pEX3-GLP-1R表达载体的鉴定
        2.2 TOB透析式无细胞表达体系GLP-1R蛋白的鉴定
        2.3 GLP-1R是 S6 的特异性靶标
        2.4 S6 通过GLP-1R促进胰岛素分泌
2+浓度">        2.5 S6 通过GLP-1R增加β细胞内的Ca²⁺浓度
        2.6 S6 通过GLP-1R抑制Kv通道电流
    3 讨论
    4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]胰高血糖素样肽1（GLP-1）对心血管疾病治疗的研究进展[J]. 蒋摇静,李俊峰,任丽伟,王庆华.  复旦学报(医学版). 2018(06)
[2]胰高血糖素样肽-1在胃肠道中的作用及机制的研究进展[J]. 严淋,罗和生.  胃肠病学和肝病学杂志. 2017(08)
[3]GLP-1R结构和功能及小分子药物筛选研究进展[J]. 胡中平,程念,杨帆,苏正定.  生物技术通报. 2017(02)
[4]G-蛋白偶联受体的功能测定和高通量药物筛选[J]. 许治良,高虹,欧阳克清,郑旭煦,蔡昭皙,胡应和.  中国药理学通报. 2003(12)



本文编号：2904010