胞内渗透压调控中间纤维张力及神经元突起生长机制研究
发布时间：2020-12-29 14:17
目的:神经元的极化和生长伴随着诸多力学活动。神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）能有效促进神经突起的生长。但是NGF如何通过调控胞内力学活动参与神经元极化和轴突生长少见报道。本课题采用荧光共振能量转移（Fluorescence resonance energy transfer,FRET）原理,构建了角度结构张力检测探针,量化细胞内骨架牵拉力,结合细胞内蛋白胶体和离子渗透压的定量检测,以期揭示神经细胞分化过程中,细胞骨架牵拉力以及胞内渗透压力对神经元极化及轴突生长的力学作用及其相关调控机制,继而阐明中药黄芪多糖通过调控胞内张力变化,改善神经元突起和轴突生长的药理机制。方法:NGF刺激神经元样PC12细胞,构建神经突起生长模型;并转染actin、tubulin、vimentin和GFAP四种细胞骨架荧光张力探针（AcpA、TcpT、VcpV、GcpG）,通过FRET技术将细胞内骨架牵拉张力的变化转换为光学信号,测定不同刺激下细胞内多种骨架蛋白张力的变化趋势;采用冰点渗透压仪测定细胞质总渗透压,研究胞内渗透压对细胞极化的影响;激光粒度分析仪检测细胞质蛋白纳米颗粒的...
【文章来源】：南京中医药大学江苏省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１：探针的构建??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]肌动蛋白解聚因子cofilin表达调控与神经突触可塑性研究进展[J]. 赵爽,徐志卿. 中国病理生理杂志. 2015(10)
[2]渗透压的依数性讨论[J]. 卢雁,卢泽,陈得军. 大学化学. 2013(03)
[3]丙烯酰胺对人神经母细胞瘤NB-1细胞的毒性[J]. 韩伟,王茜,曹燕花,刘楠,关维俊,王学生,肖经纬,李斌,李忠生. 中国工业医学杂志. 2012(02)
[4]黄芪有效成分抗PC12细胞缺氧损伤作用的研究[J]. 杨明,杨敏,黄为民,钱新华. 中国优生与遗传杂志. 2008(10)
[5]NGF促进神经细胞生长发育的信号通路及与哮喘发病的关系[J]. 陈双叶,方秀斌. 解剖科学进展. 2007(04)
[6]中医药疗法对神经再生的促进作用[J]. 孙永,徐斌. 中国临床康复. 2004(22)
博士论文
[1]黄芪多糖促进大鼠周围神经损伤修复的实验研究[D]. 桑秋凌.吉林大学 2008
硕士论文
[1]甘草苷促进PC12神经细胞轴突生长作用[D]. 王俊龙.延边大学 2010
本文编号：2945782
【文章来源】：南京中医药大学江苏省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１：探针的构建??
ＮｎｒＨｒ??■”？一？》？？，??ｂ＾Ｈｂ＾Ｕ?．?ｉ?ｉｎ?ｉｌ?，ｉｉ，，?ｊ｜Ｌｉｉｉ，，??？＿Ｗ?ｔｔ？?１＊５?ｌ－？?２＿５，??Ｄ?￣?．．．．?＇Ｔ＾ＰＴ??■ｎｕ?１１?■?Ｌ?ｉ??＊？？?？－？？?Ｉｊ＊？?ＩＪＳ?ｉＭｆ?ｉ？??Ｋ??，一?丨?Ｆ－＇．ｃｐＶ??ＫＳＨＨＩ??■?Ｈ?■?■?■?１?Ａｊｉ???Ｂ—？，?丨?５！＞?■丨，?｜．？?ＩＭ?？＊??＾?一?■一?，—?？??■Ｈ?□?■■ｎ?：］Ｕｉ??图２－１：?ＰＣ１２细胞各部位中细胞骨架张力的分布情况??Ａ．四种骨架探针：ａｃｔｉｎ?（ＡｃｐＡ）、ｔｕｂｕｌｉｎ?（ＴｃｐＴ）、ｖｉｍｅｎｔｉｎ?（ＶｃｐＶ）、ＧＦＡＰ?（ＧｃｐＧ）??在未分化的ＰＣ１２细胞中的ＦＲＥＴ和光镜。Ｂ．?Ａ图ＦＲＥＴ的效率量化，ｎｓ。Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ：??用ＮＧＦ处理ＰＣ１２细胞３天后，转染含有ａｃｔｉｎ、ｔｕｂｕｌｉｎ、ｖｉｍｅｎｔｉｎ、ＧＦＡＰ探针，检测ＰＣ１２??细胞各个部分张力分布情况，用ＣＦＰ／ＦＲＥＴ比值表示。中间的三张小图分别代表细胞的胞??体、突起以及突起前端张力的情况。每个实验重复５次以上，荧光标尺为０．１到２，比例??尺为１０｜ｉｍ。??４．２?ＮＧＦ通过上调ａｃｔｉｎ和ｖｉｍｅｎｔｉｎ的张力促进神经元突起的生长??因为暴露于细胞外基质、神经生长因Ｔ和Ｋ？他信ｙ？分了？与ａｃｔｉｎ细胞骨架重组密切相??关［Ｍ，所以本实验将探讨ＮＧＦ对ａｃｔｈｉ骨架产生的解聚影响。如图２－２Ａ、Ｂ所示，给予高??浓度的ＮＧＦ?（５００ｎｇ／ｍｌ）刺激１５分钟后，ＰＣ１２细胞中ａｃｔｉｎ和ｖｉｍｅｎｔｉｎ的张力显著
Ｓｉｚｅ?（ｎｍ）?Ｓｉｚｅ?（ｎｍ）??Ｄ?＝?：？！？？？?Ｅ?＝＝。??＝＝?ｌ?５００ｌ?＝＝。??＾?１０００－１００００?＞?４００－?１０００－１００００??Ｉ?３００－?｜??Ｉ?Ｉ?３００－??ｌ?２００－?Ｉ?Ｉ?Ｌｏｏ－??１?Ｉ?Ｉ??ｗ?１００－?｜｜?１００－??Ｉ?Ｊ?■－?ｌｌＪ?■■?ｉ?０１?１１１！丄丄??／?／?＾?／?／??ＰＣ１２?ｃｅｌｌｓ?Ｐｒｉｍａｒｙ?ｃｏｒｔｉｃａｌ?ｎｅｕｒｏｎｓ??图２－３－１：?ＮＧＦ使细胞内渗透压、蛋白纳米颗粒增力口??Ａ、Ｂ、Ｃ．单独使用ＮＧＦ、ａｇｇｒｅｃａｎ、联合使用ＮＧＦ和ａｇｇｒｅｃａｎ、处理ＰＣ１２细胞和原代皮层??神经元细胞，１５分钟后测量细胞渗透压、计数率和粒径分布图绝对值。Ｄ．ＰＣ１２细胞计数??率的绝对值分布图。Ｅ．原代皮层神经元计数率绝对值分布图。每个实验重复５次以上，与??对照组相比，＊＊＊ｐ＜０．００１??氯离子在维持细胞外液离子渗透压方面发挥重要作用，而胞内氯离子的积累会导致胞??１８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]肌动蛋白解聚因子cofilin表达调控与神经突触可塑性研究进展[J]. 赵爽,徐志卿. 中国病理生理杂志. 2015(10)
[2]渗透压的依数性讨论[J]. 卢雁,卢泽,陈得军. 大学化学. 2013(03)
[3]丙烯酰胺对人神经母细胞瘤NB-1细胞的毒性[J]. 韩伟,王茜,曹燕花,刘楠,关维俊,王学生,肖经纬,李斌,李忠生. 中国工业医学杂志. 2012(02)
[4]黄芪有效成分抗PC12细胞缺氧损伤作用的研究[J]. 杨明,杨敏,黄为民,钱新华. 中国优生与遗传杂志. 2008(10)
[5]NGF促进神经细胞生长发育的信号通路及与哮喘发病的关系[J]. 陈双叶,方秀斌. 解剖科学进展. 2007(04)
[6]中医药疗法对神经再生的促进作用[J]. 孙永,徐斌. 中国临床康复. 2004(22)
博士论文
[1]黄芪多糖促进大鼠周围神经损伤修复的实验研究[D]. 桑秋凌.吉林大学 2008
硕士论文
[1]甘草苷促进PC12神经细胞轴突生长作用[D]. 王俊龙.延边大学 2010
本文编号：2945782
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