活性氧促进肺支气管细胞上皮间质转化和肺腺癌细胞迁移的机制研究

发布时间：2020-12-29 17:40

　　环境污染物、偶然的化学接触以及电离和紫外线辐射都可以直接或间接增加细胞内活性氧（ROS）的水平,作为气体交换的重要器官,肺常常受到ROS的攻击。ROS会加速肺的纤维化进程,也可以促进肺癌细胞的迁移能力,但ROS参与肺纤维化和肺癌细胞迁移的具体机制有待深入研究。其中,上皮间质转化（EMT）在肺纤维化过程中具有重要的作用。过量的ROS会引起DNA的氧化损伤。因此,对DNA损伤修复产物8-氧鸟嘌呤（8-oxoG）与肺EMT关系的研究十分必要;另外,肺癌细胞迁移是造成肺癌病人死亡的主要原因。趋化因子SDF-1与其特异性受体CXCR4和ACKR3参与肿瘤细胞向靶器官的迁移和侵袭。然而,在肺癌细胞迁移过程中ROS与CXCR4和ACKR3的关系尚不明确。因此,本论文重点研究了:（1）8-oxoG与肺支气管上皮细胞发生EMT的关系;（2）ROS对肺腺癌细胞迁移能力、CXCR4和ACKR3的影响。一方面,通过免疫荧光技术和实时荧光定量PCR检测了8-oxoG对肺支气管上皮细胞形态的影响和EMT标志基因的影响;随后,向小鼠气管灌注GOx或者8-oxoG,观察了对肺组织显微结构的影响;另一方面,通过Tran... 

【文章来源】：山西大学山西省

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

EMT示意图

活性氧促进肺支气管细胞上皮间质转化和肺腺癌细胞迁移的机制研究8图1.3SDF-1/CXCR4信号通路模式图（YujunTang，2019）Figure1.3SDF-1/CXCR4signalpathpattern(YujunTang,2019)一些实验研究表明，离体或体内阻断CXCR4与SDF-1的相互作用可抑制NSCLC细胞的生长、迁移、血管生成和转移，提高癌细胞对化疗的敏感性[113]。表达CXCR4的肺癌细胞可迁移到高水平表达SDF-1的组织或器官，包括淋巴结、对侧肺、肝和

活性氧促进肺支气管细胞上皮间质转化和肺腺癌细胞迁移的机制研究16图2.18-oxoG诱导HBEC细胞形态变化Figure2.18-oxoG-inducedmorphologicalchangesinHBECcells2.28-oxoG对BEAS-2B细胞中EMT标志基因mRNA表达量的影响为了研究8-oxoG对BEAS-2B细胞EMT相关标志基因mRNA表达量的影响，利用实时荧光定量PCR检测8-oxoG刺激BEAS-2B细胞0、1、3、6、12和24h后EMT相关标志基因的mRNA表达量，结果如图2.3所示。与对照组相比，α-SMA（图2.2A）在3，12和24h的mRNA表达量显著升高（*p<0.05），与EMT的发生相符；SNAI1（图2.2B）在1和3h的mRNA表达量显著升高（*p<0.05），这可能与SNAI1调控应激性基因的表达有关，这提示我们，由SNAI1调控的靶基因可能会随之升高或者降低其表达量，而SNAI1作为上游调控基因会抑制E-cadherin的转录；E-cadherin（图2.2C）在12h的mRNA表达量显著升高（*p<0.05），其余时间无显著性，这似乎与EMT的变化不符，可能是E-cadherin需要基因的应激性反应有关，不排除需要更长的时间才会表现出下降的可能性；虽然β-catenin（图2.2D）的mRNA表达量在各时间点无显著变化，但推测是β-catenin在细胞中表达位置发生改变，由细胞质进入细胞核；collagenI（图2.2E）在6和24h的mRNA表达量显著升高（*p<0.05），这可能与其作为胶原蛋白需要上调表达量以合成胶原纤维促进EMT进程有关；FSP1（图2.2F）在1、3、6和12h的mRNA表达量显著升高（*p<0.05），这可能有其是成纤维细胞特异性的蛋白有关，表达量上调后进行转录翻译促进EMT进程。这些基因的变化情况提示我们EMT的发生需要一定的时间，上皮细胞标志基因表达量下降受上游基因调控需要一定的反应时间，而且可能是与间质细胞标志基因表达量上升


本文编号：2946023