黄芩苷对胆管癌细胞的抑制作用及其机制研究

发布时间：2021-02-11 11:43

　　目的:探究黄芩苷（Baicalin）对胆管癌细胞的抑制作用及其分子机制。方法:（1）Baicalin对胆管癌细胞活性的影响:体外培养胆管癌细胞QBC939和RBE,不同浓度的Baicalin处理后,通过CCK-8实验检测细胞活性。（2）Baicalin影响胆管癌细胞活性的机制:使用mTORC1信号通路抑制剂Rapa（雷帕霉素）或AZD（ATP竞争性mTOR激酶抑制剂）处理QBC939和RBE细胞后,通过CCK-8实验检测细胞活性。（3）Baicalin对胆管癌细胞增殖的影响:不同浓度的Baicalin处理QBC939和RBE细胞后,通过镜下观察细胞的生长速度,以及使用平板细胞克隆形成实验分析细胞增殖的情况。（4）Baicalin影响胆管癌细胞增殖的机制:不同浓度的Baicalin处理QBC939和RBE细胞后,通过Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1和细胞周期蛋白抑制激酶p27的蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞周期。此外,Baicalin处理细胞后,使用siRNA干扰c-Myc,Western blot检测p27和Cyclin D1的蛋白水平。（5）Baicali... 

【文章来源】：西南医科大学四川省

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Baicalin抑制QBC939和RBE细胞活性

-39-和c-caspase3（caspase3的剪切条带）的蛋白表达水平。实验结果显示，Baicalin促进了-PARP和c-caspase3的表达，并在一定时间内呈现浓度依赖性（图2A）。另外，使用200μmBaicalin处理QBC939和RBE细胞后，在不同时间段（0，6，12，24和36h）检测上述凋亡标志物的蛋白表达水平，发现它们同样以时间依赖性的方式逐渐增加（图2B）。以上结果表明，Baicalin可以诱导人胆管癌细胞凋亡。图2.Baicalin诱导QBC939和RBE细胞凋亡Figure2.BaicalininducescellapoptosisofQBC939andRBEcells图2：（A）Baicalin促进QBC939和RBE细胞中-PARP和c-caspase3的表达，且呈现浓度依赖性；（B）Baicalin促进QBC939和RBE细胞中PARP和c-caspase3的表达，且呈现时间依赖性。3Baicalin抑制mTOR信号通路众所周知，mTOR信号通路可以调节细胞凋亡，在细胞癌变过程中起着至关重要的作用[43]，因此我们接下来探究了mTOR信号通路是否参与了Baicalin诱导人胆管癌细胞凋亡的过程。Westernblot结果显示，Baicalin处理的QBC939和RBE细胞中mTORC1（mTOR复合物1）信号通路下游

-40-标志物P70s6k和S6的磷酸化水平明显降低，且呈现浓度依赖性（图3A），这提示Baicalin可能通过mTORC1-P70s6K抑制人胆管癌细胞活性。为了验证mTORC1-P70s6k信号通路在人胆管癌细胞活性中的作用，分别采用雷帕霉素（Rapa）和AZD-8055（AZD）两种mTOR复合体抑制剂处理QBC939和RBE细胞，随后通过CCK-8实验检测细胞活性。如图3B所示，加入Rapa或AZD明显降低了两种胆管癌细胞的活性。与此同时，PARP和c-caspase3的蛋白表达水平明显增加，尤其是在AZD处理的情况下（图3C）。值得注意的是，Westernblot结果发现，Baicalin处理后显著增加了raptor（Ser792）的磷酸化（图3D），而raptor（Ser792）的磷酸化是mTORC1中不可缺少的负调节因子之一。以上结果表明Baicalin可能通过促进QBC939和RBE细胞中raptor磷酸化抑制mTOR信号通路。图3.Baicalin抑制mTOR信号通路Figure3.BaicalininhibitsmTORsignalingpathway图3：（A）Baicalin抑制QBC939和RBE细胞中P70s6k和S6的磷酸化，且呈现浓度依赖性；（B）Rapa和AZD抑制QBC939和RBE细胞活性；（C）Rapa和AZD促


本文编号：3029054