尿路致病性大肠埃希菌多聚磷酸盐激酶1抑制剂的筛选及其生物学效果检测

发布时间：2021-02-21 15:00

　　研究背景与目的:尿路感染（Urinary tract infections,UTIs）是临床上最常见的感染性疾病之一,多见于妇女、老年人和儿童。随着耐药菌株在全球的传播,UTIs的治疗成为临床一项严峻的挑战。虽然革兰阳性和革兰阴性细菌均可引起UTIs,但95%的社区获得性UTIs是由尿路致病性大肠埃希菌（Uropathogenic Escherichia coli,UPEC）引起的。药敏试验表明,UPEC对常规抗生素的耐药率非常高,甚至已突破最后一道防线（如多粘菌素）。因此,迫切需要开发新型抗生素或方法来对抗UPEC。大多数常规抗生素影响细菌的生命结构合成。例如,甲氧西林和万古霉素靶向细菌细胞壁合成,多粘菌素靶向细胞膜,喹诺酮类抑制细菌生长过程中的关键酶。也有学者认为,抑制细菌毒力而不是杀死病原体可能是治疗细菌感染的另一种策略。多磷酸盐激酶1（Polyphosphate kinase 1,PPK1）是多种细菌病原体中的一种重要激酶,负责多聚磷酸盐（Polyphosphate,Poly P）合成并参与ATP代谢。研究表明,PPK1与细菌的运动性、生物膜形成、群体感应和毒力因子的表达密切相... 

【文章来源】：广州医科大学广东省

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

大肠埃希菌注：A：大肠埃希菌PPK1结构示意图

PPK1蛋白与化合物8/17结合的Biacore传感图

实验结果233.分子对接研究为了更好地了解化合物8和17与PPK1的相互作用，使用DiscoveryStudio进行了分子对接研究。如图4A所示，化合物8的最高得分姿势显示在分子的硝基和PPK1的氨基酸残基Asn459/Asn461之间存在两个氢键。预测到化合物8的硝基和PPK1的Asp407之间会产生有吸引力的电荷相互作用。另外，化合物8的苯并咪唑和苯环与PPK1侧链的Arg375，Arg405，Tyr468和His592之间建立了疏水相互作用。而化合物17与PPK1的Trp14，Glu48，Arg53和Arg375建立了五个常规氢键。发现PPK1的Arg53通过两个卤素键与化合物17的三氟甲基相互作用。此外，在化合物17与PPK1侧链的Trp14，Phe17，Arg375和Tyr468之间可以发现许多疏水相互作用（图4B）。图4PPK1蛋白与化合物8/17的分子对接图注：A：化合物8与PPK1蛋白的分子对接图；B：化合物17与PPK1蛋白的分子对接图。4.化合物8和17对PPK1酶活性的影响为了研究化合物8和17是否可以影响PPK1的酶活性，在酶反应体系中加入不同浓度的化合物8或17孵育，将不加化合物的酶反应体系作为对照组，将加了DMSO的酶反应体系作为溶剂对照组。结果如图5所示，DMSO溶剂对照组的酶活性是对照组的（0.94±0.02）%，差异无统计学意义（P>0.05），说明DMSO对PPK1酶活性没有明显影响。与对照组相比，当化合物8浓度为5μM、20μM、80μM、320μM时，酶活性分别是对照组的（0.71±0.04）%、（0.65±0.04）%、（0.64±0.04）%、（0.60±0.06）%，差异有统计学意义（P<0.01，

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3044516