二甲双胍通过抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤的影响

发布时间：2021-03-06 08:22

　　目的:采用肝毒性药物四氯化碳（CCL4）构建小鼠急性肝损伤模型,探讨二甲双胍通过抑制PI3K-AKT-m TOR信号通路对CCL4诱导的小鼠急性肝损伤的影响,为临床上靶向治疗急性肝损伤提供新思路。方法:选取18只6-8周龄健康雄性C57BL/6小鼠随机分组:正常对照组、CCL4模型组和CCL4模型+二甲双胍干预组（n=6）,模型组和干预组采用腹腔注射40%CCL4（5 m L/kg）构建小鼠急性肝损伤模型,正常对照组给予等渗盐水,造模前干预组腹腔注射二甲双胍（溶于生理盐水,按照小鼠体重400 mg/kg剂量给药）预先处理6 h,其余两组给予等渗盐水。18 h后麻醉小鼠摘眼球采血检测谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）;称量小鼠的肝重和体重作肝重体重比;采用石蜡包埋肝组织制备切片,HE染色观察小鼠肝脏的病理变化情况;通过ELISA与RT-q PCR检测小鼠肝组织中的炎症因子（IL-6,TNF-α,IL-10）及其基因m RNA表达水平;用Western-blot检测小鼠肝组织中PI3K、AKT、m TOR蛋白磷酸化水平,以及Th17细胞和Treg细胞转录因子ROR-γt、Foxp3... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：39 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

二甲双胍对CCL4诱导的急性肝损伤小鼠肝组织病理学的影响

山西医科大学硕士学位论文10A：急性肝损伤小鼠肝脏表观形态B：急性肝损伤小鼠肝重体重比图2-1二甲双胍对CCL4诱导的小鼠急性肝损伤肝脏形态及肝重比的影响2.2小鼠肝脏病理学改变各组小鼠肝脏组织采用石蜡包埋，制备成切片后HE染色，通过显微镜观察并拍照记录肝脏组织细胞结构形态变化。结果如图2-2所示，正常对照组小鼠肝脏细胞排列整齐,组织结构规则，未见异常病理学变化，与正常对照组相比，模型组小鼠肝脏细胞核质比变大，出现不同程度的气球样变及坏死灶，且肝小叶不规则。与CCL4模型组相比，二甲双胍干预组肝细胞气球样变和坏死灶明显减少，肝组织结构较完整。见图2-2：图2-2二甲双胍对CCL4诱导的急性肝损伤小鼠肝组织病理学的影响B

山西医科大学硕士学位论文11运用BECKMANAU5821全自动生化分析仪测量各组小鼠血清中ALT、AST的浓度，与正常对照组对比，CCL4模型组18h后，小鼠血清中ALT、AST水平均显著上升（P＜0.001）；而给予二甲双胍预保护，ALT表达水平有所降低（P=0.007），同时AST表达水平也降低（P=0.006），结果均具有统计学差异（n=6，ALT水平统计中F＝16.126,AST水平统计中F＝25.568）。见如图2-3：A:急性肝损伤小鼠血清转氨酶ALT表达水平B:急性肝损伤小鼠血清转氨酶AST表达水平图2-3CCL4诱导的小鼠急性肝损伤血清转氨酶表达水平2.4各组小鼠体内炎症因子表达水平变化本研究通过ELISA和RT-qPCR实验测定小鼠体内炎症因子IL-6、IL-10和TNF-α的表达水平。2.4.1ELISA实验结果与正常对照组比较，CCL4模型组小鼠肝脏组织匀浆中IL-6、IL-10、TNF-α的表达水平均升高（P＜0.001），差异均具有统计学意义。给予二甲双胍预保护，小鼠肝脏组织匀浆中炎症因子IL-6、TNF-α的表达明显降低（P＜0.05），小鼠肝脏组织匀浆中抗炎因子IL-10明显升高（P=0.020），均具有统计学差异（n=6，其中肝脏组织匀浆表达水平统计中IL-6：F=92.88；TNF-α：F=115.6；IL-10：F=165.1）见图2-4-1：AB2.3小鼠血清转氨酶变化

【参考文献】：
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本文编号：3066756