腺相关病毒介导的增强型绿色荧光蛋白基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞的实验研究

发布时间：2021-03-06 07:10

　　目的比较四种不同血清型腺相关病毒（adeno-associatedvirus,AAV）介导增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞（guinea pig scleral fibroblast,GSF）的转染效率及安全性,筛选合适的基因转染载体。方法原代分离培养GSF并鉴定,利用AAV2、AAV5、AAV8、AAV9介导EGFP基因并按不同感染复数（multiplicity of infection,MOI）10、100、1000、10 000转染GSF,空白对照组加入空白培养基,转染后2 d、3 d、4 d、5 d荧光显微镜下观察GFP表达强度及细胞生长状态,流式细胞术检测细胞转染率及凋亡率,CCK-8法检测细胞活力。结果 AAV感染GSF后2 d各组均可见弱荧光,荧光强度随时间延长及MOI值增大而增强,而AAV9-EGFP组全程弱荧光,空白对照组全程无荧光。转染后5 d,MOI=10 000时各组荧光最强,基因转染率组间整体比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;组间两两比较,AAV8-EG... 

【文章来源】：眼科新进展. 2020,40(11)北大核心

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

原代培养的GSF及免疫荧光染色结果(标尺=50 μm)

EGFP基因转染GSF后2 d各转染组均可见弱荧光,在AAV2-EGFP组、AAV5-EGFP组和AAV8-EGFP组中,荧光强度随感染时间延长及MOI值变大而增强;转染后5 d、MOI=10 000时荧光强度最强。EGFP在细胞中表达呈绿色,弥漫整个细胞核和细胞质,AAV8-EGFP组荧光强度明显强于AAV2-EGFP组与AAV5-EGFP组(见图2-图4)。AAV9-EGFP组在各时间点及各MOI值时均为微弱荧光。空白对照组全程未见荧光。基因转染后每天显微镜下观察细胞生长状态良好,未见细胞脱壁及肿胀变形。图3 AAV5-EGFP组转染后不同时间荧光表达情况(×100)

AAV5-EGFP组转染后不同时间荧光表达情况(×100)

【参考文献】：
期刊论文
[1]慢病毒介导绿色荧光蛋白基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞的实验研究[J]. 张兰兰,于健,吴炳义,刘琼,汤明芳,谭青,胡小娜.  眼科新进展. 2011(12)
[2]8型重组腺相关病毒介导绿色荧光蛋白基因在角膜基质细胞中的表达及影响[J]. 汤明芳,于健,白浪,刘琼.  国际眼科杂志. 2011(05)
[3]2型重组腺相关病毒转染新西兰兔关节软骨细胞的体外研究[J]. 李连华,翁习生,邱贵兴,吴志宏,林进,金今,王炜,杨新宇.  中华医学杂志. 2006(21)



本文编号：3066655