胶质瘤细胞有氧糖酵解与谷氨酸代谢协调效应研究
发布时间：2021-04-26 04:34
有氧糖酵解作为肿瘤细胞特有的一种代谢模式,成为抗肿瘤治疗研究的热点。但是,许多研究发现,肿瘤细胞能够在有氧糖酵解受损时存活下来。除了有氧糖酵解之外,“谷氨酰胺成瘾”是肿瘤细胞代谢的第二大特点。在肿瘤细胞中谷氨酰胺产生的谷氨酸具有多种代谢途径,包括被肿瘤细胞排出胞外以换取胱氨酸,参与生成抗氧化剂谷胱甘肽（glutathione,GSH）以及转化为α-酮戊二酸（α-ketoglutarate,α-KG）进入三羧酸循环（Tricarboxylic acid cycle,TCA）供能。研究表明,胶质瘤细胞的有氧糖酵解与谷氨酰胺代谢具有协同效应以满足肿瘤细胞对生物能和生物合成的需求。因此,更好地理解肿瘤细胞有氧糖酵解与谷氨酰胺代谢之间的关系可能会找到新的治疗方案。在本研究中,我们发现抑制神经胶质瘤细胞糖酵解或剥夺葡萄糖,谷氨酸外排异常增加。我们进一步发现,抑制糖酵解或葡萄糖饥饿会诱导谷氨酸/胱氨酸反向转运蛋白xCT（glutamate/cystine antiporter xCT或SLC7A11）和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-glutamate cysteine synthase,γ-GCS）...
【文章来源】：山西大学山西省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 神经胶质瘤研究现状
1.1.1 神经胶质瘤概述
1.1.2 神经胶质瘤的临床表现
1.1.3 神经胶质瘤治疗现状和进展
1.2 肿瘤细胞的代谢重编程
1.2.1 代谢重编程概述
1.2.2 有氧糖酵解与肿瘤细胞的关系
1.2.3 谷氨酸代谢与肿瘤细胞的关系
1.3 肿瘤细胞氧化还原平衡
1.3.1 肿瘤细胞氧化还原平衡概述
1.3.2 谷氨酸胱氨酸转运系统与肿瘤细胞的关系
1.3.3 还原型谷胱甘肽与肿瘤细胞的关系
1.4 论文的设计思路
1.4.1 研究内容与意义
1.4.2 实验流程图
1.4.3 研究的创新点
第二章 OPA衍生化检测胶质瘤胞外谷氨酰胺和谷氨酸
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 细胞株
2.2.2 实验试剂
2.2.3 实验仪器
2.2.4 相关试剂的配制
2.3 实验方法
2.3.1 OPA衍生化谷氨酰胺和谷氨酸
2.3.2 HPLC检测OPA衍生化谷氨酰胺和谷氨酸的标准品
2.4 实验结果
2.4.1 OPA衍生化谷氨酰胺和谷氨酸最佳波长的确定
2.4.2 HPLC检测OPA衍生化谷氨酰胺和谷氨酸的标准品
2.5 讨论
第三章 糖酵解阻断时谷氨酸代谢回补维持氧化还原平衡
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 细胞株
3.2.2 实验试剂
3.2.3 实验仪器
3.2.4 相关试剂的配制
3.3 实验方法
3.3.1 细胞培养
3.3.2 葡萄糖和乳酸含量的检测
3.3.3 谷氨酸含量的检测
3.3.4 实时荧光定量PCR检测mRNA水平
3.3.5 蛋白质免疫印迹分析
3.3.6 谷氨酸脱氢酶（GLUD1）活性的检测
3.3.7 还原型谷胱甘肽（GSH）含量的检测
3.3.8 活性氧（ROS）含量的检测
3.3.9 统计学分析
3.4 实验结果
3.4.1 抑制糖酵解降低葡萄糖消耗并减少乳酸分泌
3.4.2 糖酵解阻断时谷氨酸外排增多
3.4.3 抑制糖酵解促进xCT和γ-GCS的转录水平升高
3.4.4 抑制糖酵解上调xCT和γ-GCS的蛋白表达并降低GLUD1 活性
3.4.5 糖酵解阻断时谷氨酸代谢回补维持氧化还原平衡
3.5 讨论
第四章 阻断谷氨酸的氧化还原途径增强糖酵解抑制剂敏感性
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 细胞株
4.2.2 实验试剂
4.2.3 实验仪器
4.2.4 相关试剂的配制
4.3 实验方法
4.3.1 细胞培养
4.3.2 MTT检测细胞增殖
4.3.3 还原型谷胱甘肽（GSH）含量的检测
4.3.4 活性氧（ROS）含量的检测
4.3.5 统计学分析
4.4 实验结果
4.4.1 糖酵解抑制剂联合xCT或γ-GCS的抑制剂降低谷胱甘肽水平
4.4.2 糖酵解抑制剂联合xCT或γ-GCS的抑制剂降低细胞活力
4.5 讨论
总结与展望
参考文献
附录1 缩略语
附录2 实验仪器
附录3 相关溶液的配制
致谢
个人简况及联系方式
本文编号：3160745
【文章来源】：山西大学山西省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 神经胶质瘤研究现状
1.1.1 神经胶质瘤概述
1.1.2 神经胶质瘤的临床表现
1.1.3 神经胶质瘤治疗现状和进展
1.2 肿瘤细胞的代谢重编程
1.2.1 代谢重编程概述
1.2.2 有氧糖酵解与肿瘤细胞的关系
1.2.3 谷氨酸代谢与肿瘤细胞的关系
1.3 肿瘤细胞氧化还原平衡
1.3.1 肿瘤细胞氧化还原平衡概述
1.3.2 谷氨酸胱氨酸转运系统与肿瘤细胞的关系
1.3.3 还原型谷胱甘肽与肿瘤细胞的关系
1.4 论文的设计思路
1.4.1 研究内容与意义
1.4.2 实验流程图
1.4.3 研究的创新点
第二章 OPA衍生化检测胶质瘤胞外谷氨酰胺和谷氨酸
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 细胞株
2.2.2 实验试剂
2.2.3 实验仪器
2.2.4 相关试剂的配制
2.3 实验方法
2.3.1 OPA衍生化谷氨酰胺和谷氨酸
2.3.2 HPLC检测OPA衍生化谷氨酰胺和谷氨酸的标准品
2.4 实验结果
2.4.1 OPA衍生化谷氨酰胺和谷氨酸最佳波长的确定
2.4.2 HPLC检测OPA衍生化谷氨酰胺和谷氨酸的标准品
2.5 讨论
第三章 糖酵解阻断时谷氨酸代谢回补维持氧化还原平衡
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 细胞株
3.2.2 实验试剂
3.2.3 实验仪器
3.2.4 相关试剂的配制
3.3 实验方法
3.3.1 细胞培养
3.3.2 葡萄糖和乳酸含量的检测
3.3.3 谷氨酸含量的检测
3.3.4 实时荧光定量PCR检测mRNA水平
3.3.5 蛋白质免疫印迹分析
3.3.6 谷氨酸脱氢酶（GLUD1）活性的检测
3.3.7 还原型谷胱甘肽（GSH）含量的检测
3.3.8 活性氧（ROS）含量的检测
3.3.9 统计学分析
3.4 实验结果
3.4.1 抑制糖酵解降低葡萄糖消耗并减少乳酸分泌
3.4.2 糖酵解阻断时谷氨酸外排增多
3.4.3 抑制糖酵解促进xCT和γ-GCS的转录水平升高
3.4.4 抑制糖酵解上调xCT和γ-GCS的蛋白表达并降低GLUD1 活性
3.4.5 糖酵解阻断时谷氨酸代谢回补维持氧化还原平衡
3.5 讨论
第四章 阻断谷氨酸的氧化还原途径增强糖酵解抑制剂敏感性
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 细胞株
4.2.2 实验试剂
4.2.3 实验仪器
4.2.4 相关试剂的配制
4.3 实验方法
4.3.1 细胞培养
4.3.2 MTT检测细胞增殖
4.3.3 还原型谷胱甘肽（GSH）含量的检测
4.3.4 活性氧（ROS）含量的检测
4.3.5 统计学分析
4.4 实验结果
4.4.1 糖酵解抑制剂联合xCT或γ-GCS的抑制剂降低谷胱甘肽水平
4.4.2 糖酵解抑制剂联合xCT或γ-GCS的抑制剂降低细胞活力
4.5 讨论
总结与展望
参考文献
附录1 缩略语
附录2 实验仪器
附录3 相关溶液的配制
致谢
个人简况及联系方式
本文编号：3160745
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