粗毛纤孔菌中酚酸类成分及抗炎活性研究

发布时间：2021-06-10 01:32

　　桑黄,是一种珍贵药用多孔菌具有2000多年悠久历史。在历代草本记载中,对于癖饮、血崩、脾虚和泄挥等疾病具有很好的治疗效果,但不同国家和地区对桑黄的了解认识不同。因而有诸多学者致力于桑黄的正本清源,本课题组经过前期大量研究,基于科学文献和研究认为最切合典籍记载的中药桑黄为粗毛纤孔菌（Inonotus hispidus）。为更全面研究鉴别寄生于不同树种的粗毛纤孔菌,提供质量参考与生物活性研究依据。本论文对寄生于水曲柳的粗毛纤孔菌子实体分离提取纯化,获得4种多酚类单体化合物,并运用Griess、ELISA、RT-PCR、Western-blot等检测方法围绕其主要成分phelligridin D开展抗炎活性实验;通过网络药理学方法,利用pubchem、Swiss Target Prediction等数据库进一步预测筛选出四种化合物成分及其发挥作用的相关靶点,挖掘炎症已知相关靶点,通过生物学信息注释数据库（DAVID）对靶点基因本体（GO）生物过程、细胞组成、分子功能以及KEGG中代谢通路进行分析,采用分子对接技术虚拟筛选四个化合物对抗炎的物质基础;以东北地区取样本量较多的寄生于水曲柳的粗毛纤... 

【文章来源】：长春工业大学吉林省

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

粗毛纤孔菌提取萃取流程图

第2章寄生于水曲柳的粗毛纤孔菌酚酸类成分及抗炎活性研究9减压下干燥。将该组分用二氯甲烷：甲醇（2:1）充分溶解后，在12000转/分钟条件下，离心10分钟，取上层清液。选用SephadexLH20色谱柱，以二氯甲烷：甲醇（2:1）的溶剂系统进行梯度洗脱，将流速调节为0.8mL/min，分离得到3个流出部分A（0~100分钟）、B（100~200分钟）、C（200~300分钟）。合并B、C两处流出部分，经减压干燥处理用适量甲醇溶解，在甲醇：0.1%甲酸水（55:45）为流动相，检测波长为254nm的色谱条件下，用岛津ShimadzuLC-10A分析型高效液相色谱仪对化合物出峰对比验证。最后，通过岛津ShimadzuLC-20AP制备型高效液相色谱仪不断分离纯化，最终获得得到四个单体化合物I、II、III、IV。流程图见图2.2。图2.2粗毛纤孔菌乙酸乙酯层分离流程图Fig.2.2Inonotushispidus"sethylacetatelayerseparationflowchart2.1.4.3高效液相色谱法对流出部分的跟踪检测采用NanologicaSVEAC18色谱柱（250×4.6mm，5μm）色谱柱，以0.1%甲酸水溶液（A）-甲醇（B）为流动相，流速1mL·min-1；检测波长：400nm；柱温30℃；进样量:10μL[41]。经过初步纯化处理后A、B两个流出部分进行检测可得。

第2章寄生于水曲柳的粗毛纤孔菌酚酸类成分及抗炎活性研究10图2.3流份A初步纯化后的高效液相色谱图Figure1.3TheHPLCfigureoffractionApreliminarypurification图2.4流份B初步纯化后的高效液相色谱图Figure1.4TheHPLCfigureoffractionBpreliminarypurification分别将流份A、流份B合并，将合并液减压干燥后用少量甲醇溶解，在上述色谱条件下，用ShimadzuLC-20AP制备型岛津高效液相色谱仪进行分离，分别收集峰1、峰2、峰3、峰4的峰尖，反复进行上述步骤，直至纯度合格得到4个单体化合物。且以出峰时间为顺序，分别将纯度合格的峰1、峰2、峰3、峰4处物质命名为化合物Ⅰ，化合物Ⅱ，化合物Ⅲ和化合物Ⅳ。


本文编号：3221740