三叶苷抗β-淀粉样蛋白25-35诱导的HT22细胞凋亡作用及机制研究
发布时间：2021-06-14 19:48
目的:探索三叶苷对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的HT22细胞损伤的作用,并初步探索其可能的作用机制。方法:将HT22细胞分为空白对照组（Control）、空白对照+TLB 50μM组、模型组(20μM Aβ25-35)、Aβ25-35+TLB组（12.5μM、25μM、50μM）。模型组加入Aβ25-3520μmol/L,给药组给予12.5μM、25μM、50μM TLB与Aβ25-355-35 20μmol/L共同作用48 h后,采用MTT法测定不同浓度TLB对Aβ25-35诱导的HT22细胞活力的影响;乳酸脱氢酶（LDH）法检测TLB对Aβ25-35诱导的HT22细胞死亡情况的影响;TUNEL染色法检测HT22细胞的凋亡;通过ELISA法和Mito-SOX染色法分别检测细胞内活性氧（ROS）和线粒体内ROS（mtROS）含量;通过ELISA法检测抗氧化物酶活性;通过Western blot法分析Bax、Bcl-2...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TLB浓度依赖性的抑制Aβ25-35诱导的HT22细胞损伤
16withdifferentconcentrationsofTLB(12.5,25,and50μM)and20μMAβ25-35for48h.(B)ThecellviabilitywasdeterminedbyMTTassay.(C)LDHreleasefromHT22cellswasmeasuredusinganLDHassaykit.(D)TheprotectiveeffectsofTLBonAβ25-35-inducedmorphologicalalternation.Datawerepresentedasmean±SD.(n=6)(x±SD).**P<0.01versuscontrolgroup;##P<0.01versusAβ25-35group.2.2TLB降低HT22细胞中Aβ25-35诱导的ROS和MDA含量结果表明，Aβ25-35组较空白对照组细胞内ROS和mtROS含量明显增加（图2A，B)，MDA含量明显增加(图2C)；而TLB组较Aβ25-35组中ROS和MDA含量明显减少并呈浓度依赖性，提示TLB能够明显抑制Aβ25-35诱导的HT22细胞氧化损伤。图2TLB浓度依赖性的降低Aβ25-35诱导的HT22细胞中ROS和MDA含量。不同浓度的TLB（12.5、25和50μM）与20μMAβ25-35共同作用48h。（A）通过DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS的含量。（B）使用Mito-SOXRed荧光探针检测mtROS水平（红色荧光）。（C）MDA的含量。（n=6）（x±SD），与对照组比较，**P<0.01；与Aβ25-35组相比，#P<0.05，##P<0.01Figure2TLBinhibitedthegenerationofROSandMDAinducedbyAβ25-35inHT22cells.HT22cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofTLB(12.5,25,and50μM)and20μMAβ25-35for48h.(A)TheintracellularROScontentwasevaluatedbyDCFH-DAfluorescenceprobe.(B)TheMito-SOXRed
17fluorescentprobewasusedtodetectmtROSlevel.(C)ThelevelofMDAwasmeasuredusingMDAELISAkit.Datawerepresentedasmean±SD.(n=6).(x±SD).**P<0.01versuscontrolgroup;#P<0.05,##P<0.01versusAβ25-35group.2.3TLB增加Aβ25-35诱导的HT22细胞损伤中的抗氧化酶活性结果显示，与空白对照组比较Aβ25-35组的SOD活力、GSH-Px活力和GSH的含量明显降低，抗氧化酶活性降低；TLB组较Aβ25-35组SOD活力、GSH-Px活力以及GSH含量明显增加（图3A-C）。提示TLB能够明显增加Aβ25-35诱导的HT22细胞损伤的抗氧化酶活力。图3TLB对Aβ25-35诱导的HT22细胞损伤中的抗氧化酶活性的影响。不同浓度的TLB（12.5、25和50μM）与20μMAβ25-35共同培养48h。（A）SOD活力。（B）GSH-Px活力。（C）GSH含量。（n=6）（x±SD），与对照组相比较，**P<0.01；与Aβ25-35组相比较，##P<0.01。Figure3TLBincreasedanti-oxidantenzymeactivitiesinAβ25-35-inducedinjuryinHT22cells.HT22cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofTLB(12.5,25,and50μM)and20μMAβ25-35for48h.(A)SOD.activity(B)GSH-Pxactivity.(C)GSHcontent.Datawerepresentedasmean±SD.(n=6).**P<0.01versuscontrolgroup;##P<0.01versusAβ25-35group.
【参考文献】：
期刊论文
[1]阿尔茨海默病患者脑神经元凋亡机制中相关因素的研究[J]. 孟艳,王蓉,刘梦霞,盛树力. 中华老年医学杂志. 2006(04)
博士论文
[1]Aβ引起神经干细胞衰老及降低烟碱类似物ZY-1治疗的反应性[D]. 何娜.上海交通大学 2014
硕士论文
[1]三叶苷对过氧化氢诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用及机制研究[D]. 吕纯.遵义医科大学 2019
[2]多穗柯活性组分提取分离及功能特性的研究[D]. 燕妮.华南农业大学 2016
本文编号：3230216
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TLB浓度依赖性的抑制Aβ25-35诱导的HT22细胞损伤
16withdifferentconcentrationsofTLB(12.5,25,and50μM)and20μMAβ25-35for48h.(B)ThecellviabilitywasdeterminedbyMTTassay.(C)LDHreleasefromHT22cellswasmeasuredusinganLDHassaykit.(D)TheprotectiveeffectsofTLBonAβ25-35-inducedmorphologicalalternation.Datawerepresentedasmean±SD.(n=6)(x±SD).**P<0.01versuscontrolgroup;##P<0.01versusAβ25-35group.2.2TLB降低HT22细胞中Aβ25-35诱导的ROS和MDA含量结果表明，Aβ25-35组较空白对照组细胞内ROS和mtROS含量明显增加（图2A，B)，MDA含量明显增加(图2C)；而TLB组较Aβ25-35组中ROS和MDA含量明显减少并呈浓度依赖性，提示TLB能够明显抑制Aβ25-35诱导的HT22细胞氧化损伤。图2TLB浓度依赖性的降低Aβ25-35诱导的HT22细胞中ROS和MDA含量。不同浓度的TLB（12.5、25和50μM）与20μMAβ25-35共同作用48h。（A）通过DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS的含量。（B）使用Mito-SOXRed荧光探针检测mtROS水平（红色荧光）。（C）MDA的含量。（n=6）（x±SD），与对照组比较，**P<0.01；与Aβ25-35组相比，#P<0.05，##P<0.01Figure2TLBinhibitedthegenerationofROSandMDAinducedbyAβ25-35inHT22cells.HT22cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofTLB(12.5,25,and50μM)and20μMAβ25-35for48h.(A)TheintracellularROScontentwasevaluatedbyDCFH-DAfluorescenceprobe.(B)TheMito-SOXRed
17fluorescentprobewasusedtodetectmtROSlevel.(C)ThelevelofMDAwasmeasuredusingMDAELISAkit.Datawerepresentedasmean±SD.(n=6).(x±SD).**P<0.01versuscontrolgroup;#P<0.05,##P<0.01versusAβ25-35group.2.3TLB增加Aβ25-35诱导的HT22细胞损伤中的抗氧化酶活性结果显示，与空白对照组比较Aβ25-35组的SOD活力、GSH-Px活力和GSH的含量明显降低，抗氧化酶活性降低；TLB组较Aβ25-35组SOD活力、GSH-Px活力以及GSH含量明显增加（图3A-C）。提示TLB能够明显增加Aβ25-35诱导的HT22细胞损伤的抗氧化酶活力。图3TLB对Aβ25-35诱导的HT22细胞损伤中的抗氧化酶活性的影响。不同浓度的TLB（12.5、25和50μM）与20μMAβ25-35共同培养48h。（A）SOD活力。（B）GSH-Px活力。（C）GSH含量。（n=6）（x±SD），与对照组相比较，**P<0.01；与Aβ25-35组相比较，##P<0.01。Figure3TLBincreasedanti-oxidantenzymeactivitiesinAβ25-35-inducedinjuryinHT22cells.HT22cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofTLB(12.5,25,and50μM)and20μMAβ25-35for48h.(A)SOD.activity(B)GSH-Pxactivity.(C)GSHcontent.Datawerepresentedasmean±SD.(n=6).**P<0.01versuscontrolgroup;##P<0.01versusAβ25-35group.
【参考文献】：
期刊论文
[1]阿尔茨海默病患者脑神经元凋亡机制中相关因素的研究[J]. 孟艳,王蓉,刘梦霞,盛树力. 中华老年医学杂志. 2006(04)
博士论文
[1]Aβ引起神经干细胞衰老及降低烟碱类似物ZY-1治疗的反应性[D]. 何娜.上海交通大学 2014
硕士论文
[1]三叶苷对过氧化氢诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用及机制研究[D]. 吕纯.遵义医科大学 2019
[2]多穗柯活性组分提取分离及功能特性的研究[D]. 燕妮.华南农业大学 2016
本文编号：3230216
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/3230216.html
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