大叶茜草素抗肝癌活性及作用机制研究
发布时间：2021-07-15 16:40
目的:研究大叶茜草素抗肝癌活性及其作用机制,为其在治疗肝癌的开发应用方面提供科学依据。方法:以人肝癌HepG2细胞为受试对象,采用MTT法和平板克隆法进行大叶茜草素体外抗肝癌活性研究。MTT法检测不同给药浓度、不同给药时间大叶茜草素对HepG2细胞的抑制作用,平板克隆法检测大叶茜草素对HepG2细胞长期增殖的抑制作用。选择小鼠H22肝癌细胞株,BALB/c小鼠皮下注射,建立H22肝癌皮下实体瘤小鼠模型,以阿霉素为阳性对照药,进行大叶茜草素整体动物抗肝癌作用研究。观察大叶茜草素对小鼠生长状态、肿瘤生长以及脏器的影响;同时,H&E染色检查各组小鼠肿瘤组织的变化。进一步在细胞蛋白层面阐释大叶茜草素抗肝癌的作用机制。以PI染色,采用流式细胞仪检测大叶茜草素对HepG2细胞周期影响;采用DCFH-DA荧光检测试剂盒,分别以流式细胞仪、荧光显微镜测定大叶茜草素处理的HepG2细胞、H22肿瘤组织内活性氧ROS含量;MTT法检测大叶茜草素对经过ROS抑制剂处理后的HepG2细胞的抑制作用;免疫印迹法检测大叶茜草素对HepG2细胞和小鼠H22组织中相关周期蛋白和DNA损伤标志蛋白的表达量;免疫...
【文章来源】：湖北中医药大学湖北省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大叶茜草素结构式
大叶茜草素抗肝癌活性及作用机制研究16由图可见，两种方法所得大叶茜草素纯度相似，高效液相色谱图中大叶茜草素峰面积占比均在95%以上，考虑到重结晶法更加快速高效，采用重结晶法对A段进行纯化。最终得到大叶茜草素结晶12.176g。其分离流程见图2.2。图2.2大叶茜草素的分离纯化流程图Figure2.2flowchartofIsolationandPurificationofMollugin3.成分鉴定所得化合物常温常压下为黄色结晶。TLC检测，在365nm紫外光灯下显黄绿色荧光斑点。与购得大叶茜草素对照品共薄层展开，两者色谱行为一致；混合点样斑点不分离；测定混合熔点，熔点不下降。因此，鉴定该化合物为大叶茜草素（Mollugin）。大叶茜草素结构式见图2.3。图2.3大叶茜草素结构式Figure2.3structuralformulaofMollugin
大叶茜草素抗肝癌活性及作用机制研究25图3.1不同浓度、不同给药时间大叶茜草素对HepG2细胞增殖抑制作用。A-E为大叶茜草素给药后3-48h的不同浓度大叶茜草素对应细胞存活率，F为结果汇总（*表示P≤0.05，**表示P≤0.01，***表示P≤0.001）。Figure3.1inhibitoryeffectofMolluginonHepG2cellsatdifferentconcentrationsandtimeofadministration.A-EisthecellsurvivalrateofdifferentconcentrationsofMolluginat3-48hafteradministrationofmollugin,andFistheresultsummary.(*indicatesP≤0.05,**indicatesP≤0.01,***indicatesP≤0.001.)
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国城市癌症早诊早治项目进展[J]. 陈万青,李霓,石菊芳,任建松,陈宏达,李江,代敏,赫捷. 中国肿瘤. 2019(01)
[2]茜草的研究进展[J]. 陈毅,王海丽,薛露,单鸣秋,张丽,丁安伟. 中草药. 2017(13)
[3]Leptin signaling and cancer chemoresistance:Perspectives[J]. Pierre V Candelaria,Antonio Rampoldi,Adriana Harbuzariu,Ruben R Gonzalez-Perez. World Journal of Clinical Oncology. 2017(02)
[4]Chemotherapy and target therapy for hepatocellular carcinoma:New advances and challenges[J]. Gan-Lu Deng,Shan Zeng,Hong Shen. World Journal of Hepatology. 2015(05)
[5]Advances in non-surgical management of primary liver cancer[J]. Xiao Chen,Hai-Peng Liu,Mei Li,Liang Qiao. World Journal of Gastroenterology. 2014(44)
本文编号：3286079
【文章来源】：湖北中医药大学湖北省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大叶茜草素结构式
大叶茜草素抗肝癌活性及作用机制研究16由图可见，两种方法所得大叶茜草素纯度相似，高效液相色谱图中大叶茜草素峰面积占比均在95%以上，考虑到重结晶法更加快速高效，采用重结晶法对A段进行纯化。最终得到大叶茜草素结晶12.176g。其分离流程见图2.2。图2.2大叶茜草素的分离纯化流程图Figure2.2flowchartofIsolationandPurificationofMollugin3.成分鉴定所得化合物常温常压下为黄色结晶。TLC检测，在365nm紫外光灯下显黄绿色荧光斑点。与购得大叶茜草素对照品共薄层展开，两者色谱行为一致；混合点样斑点不分离；测定混合熔点，熔点不下降。因此，鉴定该化合物为大叶茜草素（Mollugin）。大叶茜草素结构式见图2.3。图2.3大叶茜草素结构式Figure2.3structuralformulaofMollugin
大叶茜草素抗肝癌活性及作用机制研究25图3.1不同浓度、不同给药时间大叶茜草素对HepG2细胞增殖抑制作用。A-E为大叶茜草素给药后3-48h的不同浓度大叶茜草素对应细胞存活率，F为结果汇总（*表示P≤0.05，**表示P≤0.01，***表示P≤0.001）。Figure3.1inhibitoryeffectofMolluginonHepG2cellsatdifferentconcentrationsandtimeofadministration.A-EisthecellsurvivalrateofdifferentconcentrationsofMolluginat3-48hafteradministrationofmollugin,andFistheresultsummary.(*indicatesP≤0.05,**indicatesP≤0.01,***indicatesP≤0.001.)
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国城市癌症早诊早治项目进展[J]. 陈万青,李霓,石菊芳,任建松,陈宏达,李江,代敏,赫捷. 中国肿瘤. 2019(01)
[2]茜草的研究进展[J]. 陈毅,王海丽,薛露,单鸣秋,张丽,丁安伟. 中草药. 2017(13)
[3]Leptin signaling and cancer chemoresistance:Perspectives[J]. Pierre V Candelaria,Antonio Rampoldi,Adriana Harbuzariu,Ruben R Gonzalez-Perez. World Journal of Clinical Oncology. 2017(02)
[4]Chemotherapy and target therapy for hepatocellular carcinoma:New advances and challenges[J]. Gan-Lu Deng,Shan Zeng,Hong Shen. World Journal of Hepatology. 2015(05)
[5]Advances in non-surgical management of primary liver cancer[J]. Xiao Chen,Hai-Peng Liu,Mei Li,Liang Qiao. World Journal of Gastroenterology. 2014(44)
本文编号：3286079
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/3286079.html
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