基于体内过程的防己黄芪汤干预阿霉素肾病药效成分定性和定量研究
发布时间：2021-08-11 20:41
选题依据:防己黄芪汤始载于《金匮要略》,具有利水消肿、益卫固表等功效。近年来关于防己黄芪汤在临床上的应用主要集中于心源性水肿和肾病综合征等疾病,确切的利水消肿药理作用使得防己黄芪汤近年来越来越受到关注。到目前为止,课题组前期通过谱效相关辨识黄芪在防己黄芪汤干预阿霉素肾病大鼠的药效成分群。同时,课题组前期建立了防己黄芪汤体内外化学成分的分析方法,初步研究了生理状态防己黄芪汤的体内代谢,但鉴定的成分较少,分析不全面,且未对病理状态下防己黄芪汤成分的吸收进行研究。因此,进一步基于体内过程辨识防己黄芪汤干预阿霉素肾病的药效成分,并确定药效成分的含量,是至关重要的。本研究首先基于UHPLC-Q-Exactive MS对防己黄芪汤入血、尿和粪便中的成分进行分析,明确防己黄芪汤在体内的代谢过程;其次进行动物实验的研究,构建阿霉素肾病大鼠模型,采用代谢组学结合多元统计分析比较两种机体状态下药物的吸收差异成分,明确防己黄芪汤干预阿霉素肾病的药效物质基础;最后,建立基于UPLC-Qtrap-MS技术同时测定防己黄芪汤中19种成分的方法。以期通过体内过程研究,明确防己黄芪汤治疗肾病综合征的物质基础,为防己黄...
【文章来源】：山西大学山西省
【文章页数】：110 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
血清样品不同处理方法的色谱图比较（A.甲醇沉淀蛋白法；B.SPE固相萃取小柱纯化
基于体内过程的防己黄芪汤干预阿霉素肾病药效成分研究14CO和CH3的丢失，一些黄酮类化合物也可能失去葡萄糖残基[38]。例如，在负离子模式下，化合物17、18具有相同的准分子离子峰m/z255.0652[M-H]-，保留时间分别为12.32和12.52min。MS/MS显示它们的m/z分别在135.0081和119.0495处。进一步通过和对照品的保留时间和质谱碎片比较，结合文献报道[39](Lietal.,2016)，化合物17和18分别被鉴定为liquiritigenin和isoliquiritigenin。在正离子模式下碎片离子包括270.0530[M+H-CH3]+，253.0502[M+H-CH3-OH]+，225.0552[M+H-CH3-OH-CO]+和197.0598[M+H-CH3-OH-CO-CO]+。同时，m/z285.0768处的离子由于逆Diels-Alder反应（RDA）裂解，而在m/z137.0233处产生特征离子。根据标准品的MS/MS片段离子，确定化合物3为calycosin。裂解途径如图3.2所示。皂苷的鉴定皂苷类化合物是FHT中的重要成分，主要存在于黄芪和甘草中。例如，在负离子模式下，化合物的精确分子量为822.4032，在二级质谱图中失去C6H8O6得到m/z645.3633[M-H-C6H8O6]-，失去2个C6H8O6产生m/z469.3322[M-H-2C6H8O6]-。参考文献中报道的裂解规律，推测其分子式为C42H62O16[40]，最终推测25为glycyrrhizinacid，可能的裂解途径如图1所示。化合物15通过与标准品对比被鉴定为astragalosideIV，在m/z627.3870，495.3385处表现出特征离子。图3.2典型化合物可能的碎裂途径.(A)甘草酸，(B)calycosin的鉴定生物碱的鉴定
第三章基于UHPLC-Q-ExactiveMS的防己黄芪汤的体内代谢研究15生物碱类化合物是防己的特征成分。据报道，防己生物碱具有抗纤维化、抗氧化、抗炎和免疫调节作用[41]。例如，在正离子模式下化合物2产生准分子离子峰m/z623.3116[M+H]+，可进一步裂解得到m/z592.2719[M-OCH3]+和m/z580.2717[M-COCH3]+。根据与对照品的保留时间和质谱碎片比较，可以确定化合物2为（+）-tetrandrine。(+)-tetrandrine的质谱图以及可能的裂解途径如3.3所示。图3.3(+)-tetrandrine的化学结构和可能裂解途径内酯的鉴定在本研究中，FHT提取物中入血成分共检测到4种内酯。内酯通常通过失去H2O、CO和CH3而产生碎片离子。化合物14正离子模式下，保留时间为28.23min，显示准分子离子峰m/z233.1536[M+H]+，在m/z131.0860,145.1016和159.0807处产生了特征碎片。因此，结合文献的裂解规律，化合物14被初步鉴定为3-β-hydroxy-atractylone[41]。在正离子模式下，化合物28保留时间为26.83min，显示准分子离子峰m/z231.1379[M+H]+，可知其分子式为C15H18O2。进一步分析二级碎片发现，碎片离子为m/z213.1384、189.9934、185.1657，这些碎片离子被鉴定为[M+H-H2O]+、[M+H-2CH3-CH2]+、185.1657[M+H-H2O-CO]+。通过以上信息并与标准品比对，化合物28被鉴定为atractylenolideI。同样，化合物11和27都表现出相似的裂解规律。1.4.4代谢产物的鉴定利用CD软件，可以很容易地预测由精确质量测量得到的代谢物的分子量和元素组成。如表3.5，大鼠含药物血清中共鉴定78种代谢物这些化合物一般可分为四类：黄酮类、生物碱类、皂苷类和内酯类代谢物。
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于网络药理学的防己黄芪汤防治2型糖尿病的潜在作用机制研究[J]. 陈璟,徐贝贝,徐坠成,单鑫,王威,许惠琴,吕志阳. 现代盐化工. 2020(01)
[2]以7种有效成分为指标评价内蒙古不同产地黄芪药材品质[J]. 李紫岩,杨敏,王杰,张春红,李旻辉. 中国现代中药. 2020(01)
[3]基于UPLC-QE-Orbitrap-MS技术的柴胡-白芍药对血清药物化学分析[J]. 阴奇材,陈聪聪,田俊生,高晓霞,秦雪梅,杜冠华,周玉枝. 药学学报. 2019(12)
[4]Mechanisms of Chinese medical formula Fangji Huangqi Decoction as an effective treatment of nephrotic syndrome based on systems pharmacology[J]. Wang-ning Zhang,Liu Yang,Sheng-sheng He,Ai-ping Li,Xue-mei Qin. Chinese Herbal Medicines. 2019(03)
[5]花旗泽仁主要活性成分在大鼠体外肠道菌群中代谢研究[J]. 李佳欣,赵聪,李璐,陈思琦,邢楠楠,张宇驰,吕忠民,葛鹏玲. 辽宁中医药大学学报. 2019(06)
[6]肠道菌群对药物代谢影响的研究进展[J]. 陈玉艳,王荣,张娟红,鹿辉,李文斌,王昌,孙月梅. 中国药理学通报. 2019(02)
[7]中药黄芪中黄酮类化合物抗氧化活性的DFT研究[J]. 刘靖丽,于海东,梁艳妮. 化学与生物工程. 2019(01)
[8]基于中医方证代谢组学分析四物汤对自然衰老小鼠的干预作用[J]. 西旺,闫起,王燕,李奇玮,梁华. 中国实验方剂学杂志. 2019(12)
[9]Caco-2细胞体外吸收模型的建立及验证[J]. 吕晓君,曹易丹,何开勇. 医药导报. 2018(11)
[10]药用黄芪皂苷类化学成分及药理作用研究进展[J]. 唐冕,许晓芬. 中医药导报. 2018(20)
硕士论文
[1]基于谱效相关辨识黄芪在防己黄芪汤干预阿霉素肾病大鼠的药效成分群[D]. 张王宁.山西大学 2019
[2]防己黄芪汤的化学成分及其体内代谢研究[D]. 陈萌.山西大学 2018
[3]小续命汤有效成分组药物代谢动力学研究及蛋白质组学初探[D]. 陈茜睿.北京协和医学院 2017
[4]基于中药血清药物化学方法的防己黄芪汤药效物质基础研究[D]. 魏珊.山西中医药大学 2017
[5]八珍汤在血中代谢行为的研究[D]. 胡扬.哈尔滨商业大学 2012
本文编号：3336858
【文章来源】：山西大学山西省
【文章页数】：110 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
血清样品不同处理方法的色谱图比较（A.甲醇沉淀蛋白法；B.SPE固相萃取小柱纯化
基于体内过程的防己黄芪汤干预阿霉素肾病药效成分研究14CO和CH3的丢失，一些黄酮类化合物也可能失去葡萄糖残基[38]。例如，在负离子模式下，化合物17、18具有相同的准分子离子峰m/z255.0652[M-H]-，保留时间分别为12.32和12.52min。MS/MS显示它们的m/z分别在135.0081和119.0495处。进一步通过和对照品的保留时间和质谱碎片比较，结合文献报道[39](Lietal.,2016)，化合物17和18分别被鉴定为liquiritigenin和isoliquiritigenin。在正离子模式下碎片离子包括270.0530[M+H-CH3]+，253.0502[M+H-CH3-OH]+，225.0552[M+H-CH3-OH-CO]+和197.0598[M+H-CH3-OH-CO-CO]+。同时，m/z285.0768处的离子由于逆Diels-Alder反应（RDA）裂解，而在m/z137.0233处产生特征离子。根据标准品的MS/MS片段离子，确定化合物3为calycosin。裂解途径如图3.2所示。皂苷的鉴定皂苷类化合物是FHT中的重要成分，主要存在于黄芪和甘草中。例如，在负离子模式下，化合物的精确分子量为822.4032，在二级质谱图中失去C6H8O6得到m/z645.3633[M-H-C6H8O6]-，失去2个C6H8O6产生m/z469.3322[M-H-2C6H8O6]-。参考文献中报道的裂解规律，推测其分子式为C42H62O16[40]，最终推测25为glycyrrhizinacid，可能的裂解途径如图1所示。化合物15通过与标准品对比被鉴定为astragalosideIV，在m/z627.3870，495.3385处表现出特征离子。图3.2典型化合物可能的碎裂途径.(A)甘草酸，(B)calycosin的鉴定生物碱的鉴定
第三章基于UHPLC-Q-ExactiveMS的防己黄芪汤的体内代谢研究15生物碱类化合物是防己的特征成分。据报道，防己生物碱具有抗纤维化、抗氧化、抗炎和免疫调节作用[41]。例如，在正离子模式下化合物2产生准分子离子峰m/z623.3116[M+H]+，可进一步裂解得到m/z592.2719[M-OCH3]+和m/z580.2717[M-COCH3]+。根据与对照品的保留时间和质谱碎片比较，可以确定化合物2为（+）-tetrandrine。(+)-tetrandrine的质谱图以及可能的裂解途径如3.3所示。图3.3(+)-tetrandrine的化学结构和可能裂解途径内酯的鉴定在本研究中，FHT提取物中入血成分共检测到4种内酯。内酯通常通过失去H2O、CO和CH3而产生碎片离子。化合物14正离子模式下，保留时间为28.23min，显示准分子离子峰m/z233.1536[M+H]+，在m/z131.0860,145.1016和159.0807处产生了特征碎片。因此，结合文献的裂解规律，化合物14被初步鉴定为3-β-hydroxy-atractylone[41]。在正离子模式下，化合物28保留时间为26.83min，显示准分子离子峰m/z231.1379[M+H]+，可知其分子式为C15H18O2。进一步分析二级碎片发现，碎片离子为m/z213.1384、189.9934、185.1657，这些碎片离子被鉴定为[M+H-H2O]+、[M+H-2CH3-CH2]+、185.1657[M+H-H2O-CO]+。通过以上信息并与标准品比对，化合物28被鉴定为atractylenolideI。同样，化合物11和27都表现出相似的裂解规律。1.4.4代谢产物的鉴定利用CD软件，可以很容易地预测由精确质量测量得到的代谢物的分子量和元素组成。如表3.5，大鼠含药物血清中共鉴定78种代谢物这些化合物一般可分为四类：黄酮类、生物碱类、皂苷类和内酯类代谢物。
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于网络药理学的防己黄芪汤防治2型糖尿病的潜在作用机制研究[J]. 陈璟,徐贝贝,徐坠成,单鑫,王威,许惠琴,吕志阳. 现代盐化工. 2020(01)
[2]以7种有效成分为指标评价内蒙古不同产地黄芪药材品质[J]. 李紫岩,杨敏,王杰,张春红,李旻辉. 中国现代中药. 2020(01)
[3]基于UPLC-QE-Orbitrap-MS技术的柴胡-白芍药对血清药物化学分析[J]. 阴奇材,陈聪聪,田俊生,高晓霞,秦雪梅,杜冠华,周玉枝. 药学学报. 2019(12)
[4]Mechanisms of Chinese medical formula Fangji Huangqi Decoction as an effective treatment of nephrotic syndrome based on systems pharmacology[J]. Wang-ning Zhang,Liu Yang,Sheng-sheng He,Ai-ping Li,Xue-mei Qin. Chinese Herbal Medicines. 2019(03)
[5]花旗泽仁主要活性成分在大鼠体外肠道菌群中代谢研究[J]. 李佳欣,赵聪,李璐,陈思琦,邢楠楠,张宇驰,吕忠民,葛鹏玲. 辽宁中医药大学学报. 2019(06)
[6]肠道菌群对药物代谢影响的研究进展[J]. 陈玉艳,王荣,张娟红,鹿辉,李文斌,王昌,孙月梅. 中国药理学通报. 2019(02)
[7]中药黄芪中黄酮类化合物抗氧化活性的DFT研究[J]. 刘靖丽,于海东,梁艳妮. 化学与生物工程. 2019(01)
[8]基于中医方证代谢组学分析四物汤对自然衰老小鼠的干预作用[J]. 西旺,闫起,王燕,李奇玮,梁华. 中国实验方剂学杂志. 2019(12)
[9]Caco-2细胞体外吸收模型的建立及验证[J]. 吕晓君,曹易丹,何开勇. 医药导报. 2018(11)
[10]药用黄芪皂苷类化学成分及药理作用研究进展[J]. 唐冕,许晓芬. 中医药导报. 2018(20)
硕士论文
[1]基于谱效相关辨识黄芪在防己黄芪汤干预阿霉素肾病大鼠的药效成分群[D]. 张王宁.山西大学 2019
[2]防己黄芪汤的化学成分及其体内代谢研究[D]. 陈萌.山西大学 2018
[3]小续命汤有效成分组药物代谢动力学研究及蛋白质组学初探[D]. 陈茜睿.北京协和医学院 2017
[4]基于中药血清药物化学方法的防己黄芪汤药效物质基础研究[D]. 魏珊.山西中医药大学 2017
[5]八珍汤在血中代谢行为的研究[D]. 胡扬.哈尔滨商业大学 2012
本文编号：3336858
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