下调miR-586对胶质瘤细胞增殖、周期的影响及机制研究

发布时间：2021-12-02 19:27

　　目的:胶质瘤现在被认为是一种遗传和表观遗传疾病,预后较差。MicroRNA（miRNA）的遗传变异被认为是胶质瘤发生的重要潜在危险因素。方法:1、使用实时荧光定量PCR实验,检测在胶质母细胞瘤临床组织样本和非肿瘤脑脑组织中microRNA-586（miR-586）的表达水平,以及检测miR-586在胶质瘤细胞株和人正常星形胶质细胞中的表达水平;2、使用CCK-8、平板克隆、流式细胞术和EdU实验,检测抑制miRNA-586后对U87细胞的生物学影响;3、通过miRNA靶基因在线预测网站预测miR-586的下游靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-586在下游靶基因3’-UTR的结合位点,以确认SFRP1是否是miR-586的直接靶标,Western blotting实验检测抑制miR-586后对下游靶基因SFRP1表达的影响;4、在下调miR-586的U87细胞株中共转染si-SFRP1,检测抑制SFRP1能否减弱下调miR-586对U87细胞的生物学影响,并使用CCK-8、流式细胞术、EdU实验及Western blotting实验进行分析;5、下调miR-586的U87细胞... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

qRT-PCR分析miR-586非肿瘤脑组织(NBTs)、胶质瘤细胞瘤（GBM）组织中的表

26第3章实验结果瘤脑组织（图1A）。同时，在正常人星形胶质细胞（NHA）和5个胶质母细胞瘤细胞系中，进一步验证miR-586的表达水平，发现miR-586在U87细胞系中表达水平最高（图1B）。这些研究表明，miR-586在胶质瘤组织和细胞中显著高表达。为了明确胶质瘤肿瘤生物过程中miR-586的潜在作用，使用DAVID在线网站工具（https://david.ncifcrf.gov/）和KEGG通路分析。如韦恩图所示（图3A），总共收集了交集大于3数据库的1905个基因，然后使用DAVID在线分析1905个基因，收集基因相关通路并使用KEGG通路富集分析，发现miR-586的靶基因主要与“癌症通路”，“Wnt信号通路”和“Focal粘附”信号通路相关（图1C）。3.2体外实验检测miR-586对胶质瘤功能的影响图2(A)qRT-PCR分析转染miR-586inhibitor或miR-NC质粒后U87细胞中miR-586的表

29第3章实验结果图4(A)Westernblotting实验检测miR-586inhibitor和si-SFRP1共转染U87细胞后SFRP1的表达。GAPDH作为内参。(B)CCK-8实验检测miR-586inhibitor和si-SFRP1共转染U87细胞后的细胞增殖能力。(C)EdU检测miR-586inhibitor和si-SFRP1共转染U87细胞后的细胞增殖能力。(原放大倍数，200×)。(D)流式细胞术检测miR-586inhibitor和si-SFRP1共转染U87细胞后的细胞周期阶段。（*代表与miR-NC+Vector组对比，#代表与3.4SFRP1可减弱miR-586对胶质瘤细胞的促癌作用

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3529050