构建CRISPR/Cas9慢病毒载体敲除人肝癌细胞株MyD88基因

发布时间：2021-12-02 20:46

　　目的:1、通过构建CRISPR/Cas9慢病毒载体,感染SMMC-7721细胞,获得稳定表达Cas9蛋白的SMMC-7721-Cas9细胞以及My D88基因敲除的SMMC-7721-My D88-/-/My D88+/+混合细胞,搭建CRISPR/Cas9基因编辑平台。2、SMMC-7721-My D88-/-单克隆细胞的筛选与敲除鉴定。方法:1、CRISPR/Cas9基因编辑平台的搭建:（1）设计合成My D88基因特异性的3对sg RNA（sg RNA-1、sg RNA-2、sg RNA-3）,并将其连接到表达质粒GV375上,重组的GV375表达质粒与包装质粒共转染到293T细胞内,产生慢病毒颗粒,并通过荧光法检测病毒滴度;（2）确定慢病毒感染的最适MOI,以及嘌呤霉素筛选的最适剂量;（3）首先将Lenti-Cas9-puro慢病毒感染SMMC-7721细胞,经嘌呤霉素筛选得到SMMC-7721-Cas9细胞,然后用Lenti-sg RNA-Cherry病毒感染SMMC-7721-Cas9细胞,获得SMMC-7721-My D88-/-/My D88+/+混合细胞,并通过PCR... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

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材料和方法
结果
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结论
参考文献
附录
致谢
综述
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本文编号：3529181